2×PAGE專用Taq PCR預(yù)混液(含染料)-核酸提取

1. 產(chǎn)品描述：

信勵(lì)致和®2×PAGE專用Taq PCR預(yù)混液(含染料)包含Taq DNA 聚合酶、dNTPs以及優(yōu)化的緩沖體系，濃度為2×，使用時(shí)只需取適量 2×PAGE 專用 Taq PCR 預(yù)混液(含染料)，加入模板和引物，并加入ddH2O 補(bǔ)足體積，使PCR Mix 溶液濃度為1×即可進(jìn)行反應(yīng)。適用于常規(guī)PCR及較短DNA片段的PCR擴(kuò)增，專用于聚丙烯酰胺電泳檢測。

2. 產(chǎn)品特點(diǎn)：

（1）使用方便，僅需加?模板和引物即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

（2）快速、高效，減少加樣步驟，節(jié)約時(shí)間，可有效降低污染和加樣錯(cuò)誤風(fēng)險(xiǎn)。

（3）組分中包含染料，擴(kuò)增產(chǎn)物可直接用于電泳檢測

2×PAGE專用Taq PCR預(yù)混液(含染料)-核酸提取

使用說明

1. 產(chǎn)品組分：

2. 儲運(yùn)條件：

-25~-15 ℃保存12個(gè)月。干冰運(yùn)輸。

3. 注意事項(xiàng)：

（1）試劑于冰上溶解。

（2）避免試劑反復(fù)凍融。

常見問題：

1. 擴(kuò)增產(chǎn)物沒有或很少？

原因分析：模板濃度過低；實(shí)驗(yàn)樣品DNA損傷或降解；PCR條件未優(yōu)化；退火溫度過高；延伸時(shí)間太短；循環(huán)次數(shù)太少；引物設(shè)計(jì)不完善；引物濃度過低；Mg2+濃度未優(yōu)化；模板質(zhì)量太差。

解決方案：建議DNA樣品不要反復(fù)凍融，以免造成DNA的損失；優(yōu)化PCR條件，對于基因片段較長的片段適當(dāng)增加延伸時(shí)間，增加循環(huán)數(shù)。

2. 出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增？

原因分析：引起該現(xiàn)象的主要原因有引物濃度未優(yōu)化或者引物降解；退火溫度過低；引物特異性低；擴(kuò)增循環(huán)數(shù)過多。

解決方案：建議將引物置于4℃或者-20℃保存；適當(dāng)提高退火溫度；設(shè)計(jì)特異性高的引物；擴(kuò)增循環(huán)數(shù)不宜超過35。

3. 陰性對照出現(xiàn)空白條帶？

原因分析：陰性對照出現(xiàn)條帶一般有三個(gè)較為常見的原因，分別是引物特異性較低、PCR體系存在污染、電泳時(shí)上樣量過多導(dǎo)致陰性對照的膠孔飄進(jìn)去了樣品。

解決方案：重新設(shè)計(jì)高特異性引物，并BLAST檢測引物特異性；重新配置PCR反應(yīng)體系；上樣時(shí)避免過多，手不要抖。

4. 電泳膠圖出現(xiàn)拖尾彌散？

原因分析：配置PCR體系時(shí)DNA聚合酶加入量過多，酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，酶量較多會產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象；PCR產(chǎn)物降解。

解決方案：建議根據(jù)反應(yīng)體系的大小及產(chǎn)品說明書加入適量的酶；建議在獲得PCR后的產(chǎn)物即可進(jìn)行電泳，置于-20℃長期儲存，盡量不要在常溫放置。