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M-MuLV Reverse Transcriptase

產(chǎn)品貨號：M2000

儲存條件：-20℃

濃度：200 units/μl

制品說明

本制品使用通過基因重組技術(shù)克隆表達(dá)的點(diǎn)突變型 RNase H 活性缺失的 M-MuLV 反轉(zhuǎn)錄酶 TRUEscript Hˉ RTase。野生型的 M-MuLV 包含的 RNase H 活性能夠催化降解 DNA/RNA 雜合體中的 RNA， 因 此 在 cDNA First-Strand 的合成反應(yīng)中可能會降解 RNA/DNA 雜合體中的模板 RNA。本酶 M-MuLV(RNase Hˉ)的 RNase H 活性缺失，與 M-MuLV 相比，具有更強(qiáng)的延伸能力和穩(wěn)定性，可用于較長的 cDNA 合成以及高比例的全 長 cDNA 文庫的構(gòu)建等。  

適用范圍：First-Strand cDNA 合成。可用于低拷貝基因的檢測。

特點(diǎn)：合成 cDNA 片段長度可達(dá) 12 kb。

First-Strand cDNA 合成(以 20 μl 反應(yīng)體系為例)

1、加入

2、輕輕混勻

如用 Oligo(dT)18 或基因特異引物(GSP)，42℃孵育 30-50min。

如用 Random Primer，25℃孵育 10 min，42℃孵育 30-50 min。

3、65℃加熱 15 min(或者 85℃加熱 5 min)失活 TRUEscript Hˉ RTase。

RT-PCR

建議取 1/10-1/5 體積(2-4 μl)的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為 PCR 模板。

建議 PCR 條件(以 50 μl 反應(yīng)體系為例)

PCR 循環(huán)

注意事項(xiàng)

1.避免 RNase 污染。

2.為保證反轉(zhuǎn)錄成功建議使用高質(zhì)量的 RNA 樣品。

3.如果 RNA 模板 GC 含量豐富或者有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)，可以先只加 RNA 模板、引物和和 RNase free H2O 混勻， 65℃變性 5 分鐘，冰上冷卻，短暫離心后加入其它成分繼續(xù)下面的反轉(zhuǎn)錄步驟。

4.TRUEscript Hˉ RTase 非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸頭外導(dǎo)致?lián)p失，用前請點(diǎn)甩離心后使用，并且避免吸頭外壁沾附損失?？梢悦看伟凑?0.8μl使用，也不影響使用效果。

5.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

6、本品僅用于實(shí)驗(yàn)研究。