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| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | FL0201 |
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2×Lab FL PCR Master Mix
產品貨號：FL0201
儲存條件：-20°C 保存2年。短時間（1個月內）使用可以置4°C。
產品說明
本產品包含Lab LastLong DNA Polymerase、dNTPs和優(yōu)化的反應緩沖液，濃度為2×。 使用時只需加入模板、引物，并補足水至Mix終濃度為1×即可。本制品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳；也可經過純化處理，以用于酶切、連接、熒光測序等后續(xù)操作。PCR產物為3，端帶A頭，純化后可直接用LABLEAD LabpO TOPO TA系列載體（貨號：PA0101、PA0102）克隆。
產品特點
1、超快的擴增速度：延伸速度可以達到5-10sec/kb，最短半小時完成PCR。
2、突出的長片段擴增能力：可擴增高達10kb的長片段（包括人類基因組此類的復雜模板）。
3、良好保真性：保真度是taq的3倍以上。
4、強大的擴增能力：產量高，對于一些有特殊結構的復雜模板和GC含量高模板有良好效果。
建議PCR 體系設置
Component | 25 μl Reaction | 50 μl Reaction | Final Concentration |
2x Lab FL PCR mix | 12.5 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | as required | as required | |
ddH2O | up to 25 μl | up to 50 μl |
參考模板用量（50 μl反應體系）
質粒：0.1-10ng；細菌基因組：10-100ng；人類基因組：50-150ng；cDNA：1-5μl from RT reaction。
建議PCR循環(huán)條件
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 94oC | 2-3 min | |
Denaturation | 94oC | 10 s | 25-35 cycles |
Annealing | 55oC | 10-15s | |
Extension | 72oC | 10 s/ kb | |
Final Extension | 72oC | 1-5 min | |
4-8oC | Hold |
注意事項
1.本品擴增速度極快， 質粒和簡單基因組等簡單模板可以嘗試5s/kb延伸速度并采用減少循環(huán)數以進一步縮短PCR時間；長片段（大于等于3kb）或者復雜模板產量較低應采用15-20s/kb延伸速度或者采用較多循環(huán)數。
2.Lab FL產量較低時可嘗試采用較長的延伸時間（如20s/kb）和循環(huán)數（如35個）可以提高產物產量。
3.對于GC含量很高的模板，短片段預變性和變性溫度可以提高到98 oC和/或適當延長變性時間。長片段為了避免DNA損傷不應該提高變性溫度，應該適當延長預變性時間到5min.，變性時間可以延長5-10s。
4.如果擴增模板GC含量高或者模板復雜擴增效果不佳時，可在反應混合物中加入DMSO到終濃度1%-8%，按照1%梯度增加摸索best濃度?；蛘呒尤胩鸩藟A至終濃度1.0-1.7 M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）
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