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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | C1002 |
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細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒
產品貨號：C1002-50T
存儲條件：-20°C避光，有效期24個月
產品說明：
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一種采用經典的碘化丙啶染色(Propidium Iodide staining)方法進行細胞周期與細胞凋亡分析。
碘化丙啶(Propidium Iodide，簡稱PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結合后可以產生熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定，然后根據DNA含量的分布情況，可以進行細胞周期和細胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導致部分基因組DNA片段在染色過程中丟失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強度小于1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細胞峰。
細胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質濃縮、核碎裂，產生凋亡小體，使細胞的光散射性質發(fā)生變化。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期，前向和側向光散射的信號均降低。因此可通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀察細胞凋亡情況。
本試劑盒通常應用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細胞狀態(tài)，才可以進行檢測。
本試劑盒足夠檢測50個樣品，每個樣品的細胞數量可以為10-100萬。
注意事項：
1）本試劑盒需要使用流式細胞儀進行檢測。需自備PBS和70%乙醇。
2）細胞處理需輕柔，盡量避免人為的損傷細胞。
3）為防止不同批次細胞在實驗時所處周期不同導致重復性差，可以在實驗前進行細胞的同步化處理。實驗細胞應處于對數生長期，貼壁細胞一般在50～80%匯合度時收集為宜。
4）400目篩網過濾是用來將粘在一起的細胞團濾掉，留下單細胞，否則會出現(xiàn)人為的多倍體干擾。如果沒有條件過濾，請在染色之前將細胞輕彈以分散，再進行染色。
5）熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
6）碘化丙啶對人體有刺激性，操作碘化丙啶時，應注意防護，保護眼睛、避免吸入。
7）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
產品組成：
產品組分 | 規(guī)格 |
染色緩沖液 | 25ml |
碘化丙啶染色緩沖液（20X） | 1.25ml |
RNase A(50X) | 0.5ml |
使用方法：
1. 細胞樣品的準備：細胞數量控制在1×105~1 × 106個。
a）貼壁細胞：小心吸除細胞培養(yǎng)液，用胰酶消化細胞，制備成單細胞懸液。1000 g離心5 min，沉淀細胞，棄上清，用1 mL預冷的PBS潤洗細胞一次，離心收集細胞。
b）懸浮細胞：1000 g離心5 min，沉淀細胞，小心吸除上清。加入1 mL預冷的PBS，重懸細胞，再次離心收集細胞。
c）組織細胞：將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后，用0.25%的胰酶消化0.5-1 h，經過200-400目篩網過濾得到單細胞懸液。1000 g離心5 min，沉淀細胞。加入約1 mL預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。如組織難以消化，可加入適量膠原酶。
2. 細胞固定：
細胞沉淀用1 mL預冷的70%乙醇輕輕混勻，4℃固定2 h以上或者過夜。然后1000 g左右離心5 min沉淀細胞后，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的70%乙醇，以避免吸走細胞。
加入1 mL預冷的PBS重懸。然后再次1000g離心5 min沉淀細胞。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
3. 碘化丙啶染色液的配制：
對于1個樣品，在0.5 mL染色緩沖液中加入25uL 碘化丙啶儲液和10uL RNase A溶液，混勻待用。其它數量的樣品參考下表，根據待檢測樣品的數量配制適量的碘化丙啶染色液：
1個樣品 | 6個樣品 | 12個樣品 | |
染色緩沖液 | 0.5mL | 3ml | 6ml |
碘化丙啶染色液(20X) | 25uL | 150uL | 300ul |
RNase A(50X) | 10ul | 60ul | 120ul |
總體積 | 0.535mL | 3.21ml | 6.42ml |
注：配制好的碘化丙啶染色液短時間內可以4℃保存，宜當日使用。
4. 染色：
每管細胞樣品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液，輕輕混勻重懸細胞沉淀，37℃避光孵育30分鐘，就可以進行流式檢測，流式檢測最hao在5h內完成。
5. 流式檢測和分析：
用流式細胞儀在激發(fā)波長488nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。
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