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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | P4000 |
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線性PEI轉染試劑
產品貨號：P4000
存儲條件：室溫運輸，粉末在室溫或4 oC保存，有效期2年。儲存液 在4 oC保存，有效期至少6個月。
產品簡介
Polyethylenimine Linear（PEI）溶液是由一種陽離子聚合物轉染試劑，分子量40000，它能與核酸形成復合物，并使該復合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉染試劑適用廣泛。該試劑可在含血清與抗生素的wan全培養(yǎng)基中發(fā)揮作用，即使在有血清存在的情況下，它仍然能高效的將核酸導入細胞。實驗操作簡單，對大多數(shù)培養(yǎng)細胞都有較高的轉染效率(用于常見細胞系，如HEK-293、HEK293T、Hep G2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等)，并且細胞毒性較低。
儲存液配置（1 mg/mL）
1.材料
PEI 40000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或類似的生物級水、1 mol/L氫氧化鈉（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空無菌過濾器、無菌HDPE或聚丙烯儲存瓶。
2. 配置儲存液（1 mg/mL）
1）于1 L玻璃燒杯，將1g PEI 40000粉末加入900 mL Milli-Q®超純水或其他相當級別的生物用水中，在磁子攪拌器上攪拌均勻，產生小渦。
2）待PEI 40000wan全溶解（通常不到5min）；
3）邊攪拌邊滴加1 mol/L氫氧化鈉溶液，調節(jié)pH為6.90~7.10；
注：如果pH值>7.10，請使用鹽酸將pH值調至6.90~7.10；
4）將溶液轉入量筒內，并加水定容到1 L。
5）用一次性0.1~0.2 µm PES真空過濾器過濾除菌，即得到1 mg/mL的儲存液。
6）根據需要分裝并儲存在4 °C，至少6個月穩(wěn)定。
操作流程（以6孔板為例）
1.細胞鋪板
提前一天將細胞種植在六孔板中，以轉染時細胞密度在70%~80%為宜。
2.轉染過程
1）在轉染前2h，移除細胞上原有的培養(yǎng)基，換為新鮮的wan全培養(yǎng)基。
2）將2ug質粒DNA用50uL無血清稀釋液稀釋，充分混勻制成DNA稀釋液。
注意：無血清稀釋液建議采用Opti-MEM或ddH2O
3）向DNA稀釋液中直接加入4uL轉染試劑，室溫靜置10~15min。轉染復合物配制完成。
4）將轉染復合物加入細胞培養(yǎng)基中，輕柔混勻。
5）繼續(xù)培養(yǎng)24~48h，收取細胞進行鑒定或加入相應抗生素篩選穩(wěn)定克隆。
6）使用本產品轉染后一般在24h開始進入表達高峰期，36~48h達到表達高峰，相對于脂質體轉染試劉，達到峰值的時間延后約6~12h。
不同細胞培養(yǎng)容器轉染用量
細胞培養(yǎng)容器 | 表面積 | 稀釋液體積 | DNA的量 | 轉染試劑的量 | 培養(yǎng)基總量 |
96-well | 0.3cm2 | 10uL | 0.1ug | 0.1uL | 100uL |
48-well | 0.7cm2 | 20uL | 0.2ug | 0.3uL | 200uL |
24-well | 1.9cm2 | 50uL | 0.5ug | 1uL | 500uL |
12-well | 3.8cm2 | 50uL | 1ug | 2uL | 1mL |
6-well/35mmdish | 10cm2 | 100uL | 2ug | 4uL | 2mL |
60mm dish/T25flask | 21cm2 | 200uL | 4ug | 8uL | 4mL |
100mm dish/T75flask | 58cm2 | 500uL | 10ug | 20uL | 10mL |
注意事項
1、對大多數(shù)細胞來而言，每1μg DNA 使用3.0μL PEI MAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率。也可嘗試每1μg DNA使用 1.5~4 μL體積線性PEI 40000轉染試劑進行優(yōu)化。
2、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套及通風櫥操作。
3、本產品僅用于科研用途，不可用于人體。
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