目錄:北京蘭博利德商貿(mào)有限公司>>蛋白研究>>WB試劑>> B5002即用型BCA蛋白定量試劑盒
| 供貨周期 | 一周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品貨號 ： B5002
儲存條件 ：試劑盒中 A、B 液 4℃保存；蛋白標準品（ BSA）置于-20℃保存 ，有效期 12 個月。
產(chǎn)品描述：
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測定方法?；陔p縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將 Cu2+ 還原成 Cu+ ，產(chǎn)生一種紫藍色復(fù)合物 ，在 562nm處有高的吸光值 ，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。 BCA 蛋白濃度 測定法實現(xiàn)了蛋白質(zhì)濃度測定的簡便、靈敏、快速和穩(wěn)定性。試劑盒中提供的蛋白標準品為用戶制作標準曲線提供了便利。 該 BCA 蛋白濃度測定試劑盒可用于比色皿法檢測 ，也可用于微孔板法檢測。前者雖需較大量（ 100μL）的蛋白樣品 ，但由 于其在檢測中使用蛋白樣品與 BCA 工作液的比率為 1:20（v/v） ，從而降低干擾物質(zhì)帶來的影響。后者操作簡單方便 ，僅 需少量（ 10-25μL）的蛋白樣品。不過 ，由于其在檢測中使用蛋白樣品與 BCA 工作液的比率為 1:8（v/v） ，某種程度上限 制干擾物質(zhì)的承受濃度以及降低*低檢測水平。本試劑盒含有一系列濃度的蛋白質(zhì)標準品溶液(BSA 溶液) ，即取即用 ，無 需稀釋 ，方便快捷。
編號 | 組分 | 產(chǎn)品包裝/規(guī)格 | 儲存 | |
500T (微孔) | B5002-C 蛋白標準品濃度梯度及編號： BSA 標準品①(0μg/mL) ； BSA 標準品②(125μg/mL) ； BSA 標準品③(250μg/mL) ； BSA 標準品④(500μg/mL) ； BSA 標準品⑤(750μg/mL) ； BSA 標準品⑥(1000μg/mL)； BSA 標準品⑦(1500μg/mL) ； BSA 標準品⑧(2000μg/mL) | |||
B5002-A | 試劑 A | 100mL | 4℃ | |
B5002 -B | 試劑 B | 3mL | 4℃ | |
B5002 -C | 蛋白標準品（ BSA） | 8 個濃度梯度各 1mL | -20℃ | |
產(chǎn)品特點
1）提供即用型標準品 ，省去繁瑣的稀釋步驟。
2）靈敏度高 ，最小檢測蛋白量可達 0.2μg ，檢測濃度下限達到 10μg/mL(在 20~1000μg/ml 濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān) 系）。
3）速度快 ，比一般的 BCA 蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。比傳統(tǒng)的 Lowry 法檢測速度約快 4 倍。
4）線性范圍廣 ，20-1000μg/mL 濃度范圍內(nèi)有較好的線性范圍。
5) 準確性高：變異系數(shù)遠小于考馬斯亮藍染色法。不受大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響, BCA 法測定蛋白濃度,蛋白濃度的測定可以耐受高濃度的去垢劑, 可以兼容樣品中高達 5%的 SDS; 5%的 Triton X- 100; 5%的 Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響 ，需確保 EDTA 低于 10mM ，無 EGTA ，二硫蘇糖醇低于 1mM; β-巰基乙 醇低于 0.01%。詳情見 7 的附表 1。
6) Bradford 法與 BCA 法的對比
方法 | Bradford 法 | BCA 法 |
靈敏度 | 1~5 μg | 0.5 ~20 μg |
時間 | 5~15 min | 40 ~60 min |
波長 | 595 nm | 562 nm |
檢測不同類別蛋白質(zhì) | 變異系數(shù)較高 | 變異系數(shù)較低 |
吸光穩(wěn)定性 | 1 h 內(nèi)穩(wěn)定 | 隨時間變化 |
操作說明：以微孔酶標儀法為例
1 配置顯色工作液：
a）計算顯色工作液總量：
工作液總量 = (BSA 標準品樣本個數(shù)＋待測樣本個數(shù) ) × 復(fù)孔數(shù) × 每個樣本顯色工作液體積 舉例 ：BSA 標準品樣本個數(shù)為 8 個 ，待測樣本個數(shù) 3 個 ，復(fù)孔數(shù) 3 個。
顯色工作液總量 = (8個BSA 標準品樣本＋3 個待測樣本 ) ×3 個復(fù)孔 ×200 μL（每個樣本工作液體積） = 6.6 mL
b）根據(jù)計算出的所需顯色工作液用量 ，將試劑 A 和試劑 B 按照 50:1 的體積比 ，配制顯色工作液 ，充分混勻。
注意 ：
1）由于加樣可能存在誤差 ，建議配制 BCA 工作液時 ，多配制 1~2 個孔的量；
2）新配制的 BCA 工作液室溫密封條件下可穩(wěn)定保存 24 h。
2 定量檢測
① 分別取即用型 BSA 標準品① ~⑧ 各 20μL 加到 96 孔板中( BSA 標準品使用前須充分溶解搖勻)；
孔號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
添加物 | 標準品① | 標準品② | 標準品③ | 標準品④ | 標準品⑤ | 標準品⑥ | 標準品⑦ | 標準品⑧ |
體積 ( μL） | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
BSA終濃度(μg/mL) | 0 | 125 | 250 | 500 | 750 | 1000 | 1500 | 2000 |
② 用 1 × PBS 或 0.9% 生理鹽水將樣品適當稀釋 (可以多作幾個梯度 ，如 2 倍、4 倍、8 倍稀釋) ，加 20μL 到 96 孔板的 樣品孔中；
③ 各孔加入 200 μL 顯色工作液 ，充分混勻 ，蓋上 96 孔板蓋 ，37℃孵育 30min ，冷卻至室溫；
注意 ：也可以室溫放置2 h ，或 60℃放置 30min。 BCA 法測定蛋白濃度時 ，吸光度會隨著時間的 延長不斷加深。并且顯色反應(yīng)會因溫度升高而 加快。如果蛋白濃度較低 ，可在較高溫度孵育 ， 或延長孵育時間。
④ 用酶標儀測定每個樣品及 BSA 標準品的 A562 ，或 540~590 nm 之間的其它波長的吸光度 ，注意要減去空白對照(標 準品① + 工作液)的吸光度。
⑤ 繪制標準曲線 ，計算樣品中的蛋白濃度。
注意 ：數(shù)據(jù)處理時需要去除明顯錯誤的值。待測樣品濃度可以從標準曲線中查得 , 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計算機繪制的曲線， 可以從計算機給出的線性方程式計算出待測樣品的濃度。
注意事項
1）本產(chǎn)品可以采用酶標儀 ( 微孔檢測法 ) 或者分光光度計 ( 試管檢測法 ) 測定蛋白濃度，如使用普通的分光光度計測定， 需根據(jù)比色皿的最小檢測體積，適當加大 BCA 工作液的用量使其不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量可相應(yīng)按比例 放大。使用分光光度計測定蛋白濃度時 ，每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少；
2）試劑在低溫條件或長期保存可能出現(xiàn)沉淀 ，若發(fā)現(xiàn) BCA 試劑 A 或者試劑 B 有沉淀發(fā)生。請 37oC 溫育并伴隨攪拌促使 其充分溶解。如發(fā)現(xiàn)細菌污染 ，則應(yīng)丟棄。
3）BCA 蛋白測定法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，需注意保持定時和定溫，以確保 精確定量。
4）每次測定都需做相應(yīng)的標準曲線 ，因為顯色反應(yīng)與溫度和時間的變化有關(guān) ，精準蛋白定量宜每次都做標準曲線。
5）如待測樣品中含較多的干擾物質(zhì) ( 具體見附表 ) ，可采用其它蛋白定量產(chǎn)品；
6）本公司所有產(chǎn)品僅限用于科研研發(fā) ，必須專業(yè)人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服并遵守生物實驗室安全操作規(guī)程！
4
化工儀器網(wǎng)