樣本收集及處理方法：

1. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織，剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

2. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 其它生物標(biāo)本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。

科研專用人骨橋素(OPN)ELISA檢測(cè)試劑盒組成：

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、12.5、25、50、100、200 ng/mL

試劑的準(zhǔn)備：20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

三.   科研專用人骨橋素(OPN)ELISA檢測(cè)試劑盒的注意事項(xiàng)：

1） 充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96板孔，以保證混勻。

2） TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑或金屬，否則容易失效。

3） 加樣時(shí)請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。加樣過程中必須避免氣泡的產(chǎn)生。

4） 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。

5） 洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。

四．實(shí)驗(yàn)中問題解答：

【檢測(cè)的結(jié)果沒有吸光度值或吸光度值很低】

可能造成的原因：1.使用的試劑盒已過有效期 2. 沒有充分回溫、孵育的溫度太低

上海軒澤康生物為您解答：建議更換有效期以內(nèi)的試劑盒，使用同一批次試劑盒內(nèi)的內(nèi)容物并嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行操作。在實(shí)驗(yàn)操作的整個(gè)過程中仔細(xì)觀察恒溫箱的溫度。

【吸光度值偏高】

可能造成的原因：孵育溫度過高，反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)。

上海軒澤康生物為您解答：建議調(diào)整孵育環(huán)境的溫度，如無法調(diào)整室內(nèi)溫度請(qǐng)將顯色時(shí)間適當(dāng)縮短，控制反應(yīng)時(shí)間。

五. 質(zhì)量保證及售后服務(wù)

一、買方嚴(yán)格按照盒子上注明的貯藏條件貯藏，因買方對(duì)產(chǎn)品保管不當(dāng)而產(chǎn)生的產(chǎn)品質(zhì)量問題由買方負(fù)責(zé)。

二、特別提示：我司出售的試劑盒均為科研試劑，嚴(yán)禁用于臨床診斷。

三、因運(yùn)輸造成的貨物損壞，由賣方與運(yùn)輸方協(xié)調(diào)解決，買方不承擔(dān)由此產(chǎn)生的損失。因不可抗力因素造成我司延期交貨或無法交貨的，我司將及時(shí)通知買方并給出解決方案。

四、試劑盒保證質(zhì)量，保質(zhì)期半年，請(qǐng)注意時(shí)效，在保質(zhì)期內(nèi)用完。我司提供業(yè)技術(shù)支持，如實(shí)驗(yàn)有任何不明白的地方可以直接聯(lián)系我司技術(shù)人員。