色譜條件：

流動相：

1、色譜柱：SyiHend Amino Acid 4.6*250mm 5µm

流動相A： 0.1mol/L醋酸鈉溶液（pH 6.5）：乙睛＝93.0：7.0

配制方法：準(zhǔn)確稱取無水醋酸鈉8.203g于1000mL水中，攪拌均勻，使之溶解，用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至6.50；準(zhǔn)確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液930mL和乙腈70mL，混合均勻，抽濾過0.22µm濾膜；  

流動相B：水：乙腈＝20.0：80.0

配制方法：準(zhǔn)確量取水200mL和乙腈800mL，混合均勻，抽濾過0.22µm濾膜；

梯度方法：

2. 梯度程序：

流動相A： 0.1mol/L醋酸鈉溶液（pH 6.50）：乙睛＝93：7

流動相B： 水：乙腈＝20：80

T(min)                    A%                     B%

0.0                       100.0                      0.0

11                        93.0                       7.0

13.9                      88.0                    12.0

14                        85.0                    15.0

29                        66.0                    34.0

30                         0.0                       100.0

35                         0.0                       100.0

35.1                       100.0                       0.0   

45                         100.0                       0.0

流　速：1.0mL/min

柱　溫：43℃

 波  長：254nm

 進樣量：5μL 

3、樣品制備衍生過程。

精密量取對照溶液5ml，加入25ml量瓶中，加入0.1mol/L異硫氰酸苯酯的乙腈溶液2.5ml，1.0mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，搖勻，室溫放置1小時后，加入50%乙腈水至刻度，搖勻，取10ml，加正己烷10ml，振搖，放置10分鐘。取下層溶液，過濾，取續(xù)濾液，即得。

4、色譜圖：

圖1、樣品衍生后

 圖2：取樣品溶液1ml加50%乙腈水稀釋1倍。（由于衍生試劑濃度過大造成樣品測定過載，形成峰分叉，樣品稀釋1倍后測定）

圣一恒德可根據(jù)不同樣品分析，提供色譜柱試用。

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