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【產(chǎn)品名稱】DMSO二甲基亞砜

【產(chǎn)品規(guī)格】100ml

【產(chǎn)品品牌】sigma

【產(chǎn)品庫存】現(xiàn)貨

【產(chǎn)品簡介】DMSO二甲基亞砜是一種滲透性保護(hù)劑，用途廣泛，能夠降低細(xì)胞冰點(diǎn)，減少冰晶的形成，減輕自由基對細(xì)胞損害，改變生物膜對電解質(zhì)、藥物、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性。

【產(chǎn)品應(yīng)用】二甲基亞砜是一種用于化學(xué)反應(yīng)（如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR)）的極性非質(zhì)子溶劑，也可作為冷凍保護(hù)玻璃化劑用于保存細(xì)胞、組織和器官。DMSO 可在細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基中用于保護(hù)細(xì)胞免受冰晶導(dǎo)致的機(jī)械損傷。它可用于原代、繼代培養(yǎng)和重組的異倍體和雜交瘤細(xì)胞系、胚胎干細(xì)胞 (ESC) 以及造血干細(xì)胞的凍存。DMSO 常與 BSA 或胎牛血清 (FBS) 一同使用。

【注意】在室溫下容易過冷并緩慢重融。 固化產(chǎn)品可以通過加熱至室溫來重新液化，而不會(huì)損害產(chǎn)品。用的時(shí)候要避免其揮發(fā)，因此需要準(zhǔn)備1%-5%的氨水備用。若皮膚不慎沾上后，可用大量的清水及稀氨水沖洗。                   

【凍存程序】

 以下程序適用于大多數(shù)細(xì)胞，如果必要，可以適當(dāng)調(diào)整。凍存培養(yǎng)基的配方請參考其細(xì)胞說明書。

1.凍存前先檢測細(xì)胞是否受到細(xì)菌、真菌、支原體和病毒的污染。通常凍存后10-14天才能得到污染檢測結(jié)果，如果確定有污染，應(yīng)將該細(xì)胞銷毀。

2.凍存培養(yǎng)基由wan全培養(yǎng)基和5% DMSO（sigma D2650）組成。由于DMSO的溶解會(huì)放熱，所以不能向細(xì)胞懸液中直接加入未稀釋的DMSO。

3.以溫和速度（125g×10 min）離心收集細(xì)胞，并以1×10*6-5×10*6活細(xì)胞/ml的密度重懸細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞直到復(fù)蘇后細(xì)胞活性得以確定。

4.在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞名稱，編號和凍存日期等信息。然后每管加入1-1.8 ml細(xì)胞懸液（視凍存管體積）并密封。

5.室溫條件下，將細(xì)胞在凍存培養(yǎng)基中平衡15-40 min（勿超）。這段時(shí)間中，可以將細(xì)胞懸液等分加入凍存管中。40min后，細(xì)胞活性可能會(huì)受到DMSO的影響而下降。

6.將凍存管置于已預(yù)冷至4℃的程序降溫盒，并將降溫盒置于-70℃（或更冷）的冰箱中至少24小時(shí)?；蛘?，使用已預(yù)冷至4℃的可編程電子降溫系統(tǒng)以1℃/min的速度將凍存管降溫至-40℃以下，然后迅速降至-130℃。

7.將凍存管迅速轉(zhuǎn)移至液氮罐或者-130℃冰箱。通常，冷凍的細(xì)胞會(huì)以10℃/min的速度升溫，一旦達(dá)到-50℃以上，細(xì)胞會(huì)劇烈受損。

8.記錄凍存位置和過程細(xì)節(jié)等信息。

9.置于-130℃ 24小時(shí)后，取出一只凍存管并復(fù)蘇，以測定細(xì)胞活性和是否污染。