目錄:柏萊源（天津）生物科技有限公司>>生物試劑>>試劑盒kit>> HG-P001HIV-1 p24 ELISA 檢測試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
貨號： HG-P001
本品采用雙抗夾心法檢測樣本中 HIV-1 p24蛋白，將HIV-1 p24特異性單克隆抗體預包被在微孔板上，將標準品與待測樣本加入到已包被的反應孔內(nèi)進行孵育。存在的 HIV-1 p24 蛋白會定量的與微孔板中的抗體結合，洗滌除去未結合物，加入生物i素標記的抗p24 抗體，最后加入親和素標記 HRP，形成抗體-抗原-生物i素抗體-酶標親和素復合物，通過TMB顯色程度指示樣品中蛋白含量。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑盒組分。
檢測范圍： 6.25 - 200 pg/mL
定 量 限： 6.25 pg/mL
檢 測 限： 3.125 pg/mL
精 密 度： CV%≤10% RE%≤±15%
96T
適用于快速檢測任何基于HIV-1的慢病毒的p24蛋白含量測定。
| 組分 | 規(guī)格 | 配制 |
| HIV-1 p24 Coated Plate(包被酶標板) | 8孔×12條 | 即用型 |
| Anti-p24-Biotin(檢測抗體100x) | 150μL×1管 | 1:99用20%CS稀釋緩沖液稀釋 |
| Streptavidin HRP(酶結合物100x) | 150μL×1管 | 1:99用20%CS稀釋緩沖液稀釋 |
| HIV-1 p24 Standard(標準品) | 30μLx1管(0.48mg/mL) | 按建議稀釋方式操作 |
| Lysis Buffer(裂解液) | 1.5mL×1管 | 即用型 |
| 20%CS Buffer | 25mL×1瓶 | 即用型 |
| Sample Diluent Buffer(樣品稀釋液) | 50mL×1瓶 | 即用型 |
| 20×PBST Wash Buffer(20×PBST洗液) | 50mL×1瓶 | 1:19用去離子水稀釋 |
| Color Reagent A(底物顯色液A) | 7mL×1瓶 | 即用型 |
| Color Reagent B(底物顯色液B) | 7mL×1瓶 | 即用型 |
| Stop Solution(終止液) | 7mL×1瓶 | 即用型 |
| 封板膜 | 5張 | 即用型 |
| 說明書 | 1份 | 即用型 |
備 注:檢測抗體、酶結合物、標準品和 20% CS Buffer -20℃保存，其他組分 2~8℃避光保存，有效期 12 個月。
◆酶標儀
◆去離子水
◆恒溫培養(yǎng)箱
◆全新濾紙
◆微量加液器及吸頭
◆渦旋振蕩器
試劑配制
1.平衡：將所需試劑移到室溫（18~25℃）平衡30分鐘。
2.配液：
①1×PBST洗滌液：計算實驗所需工作液體積，取適量20×PBST洗液，用去離子水1：19稀釋稀釋，混勻后備用。
②檢測抗體及酶結合物工作液:計算實驗所需工作液體積，取適量生物i素抗體或酶潔合物用 20% CS Buffer1：99稀釋，充分混勻備用。
③準品及樣品使用樣品稀釋液進行稀釋。
3.標準品稀釋:標準品第一個中間梯度（Pre-1）-20°C可存放 1-7 天。
| 管號 | 標準液濃度 (pg/mL) | 標準液體積 (μL) | 稀釋液體積 (μL) | 總體積 (μL) | 終濃度 (pg/mL) | 剩余體積 (μL) |
| Pre-1 | 480000000 | 5 | 495 | 500 | 4800000 | 490 |
| Pre-2 | 4800000 | 10 | 470 | 480 | 100000 | 475 |
| Pre-3 | 100000 | 5 | 45 | 50 | 10000 | 30 |
| Pre-4 | 10000 | 20 | 180 | 200 | 1000 | 80 |
| 7 | 1000 | 120 | 480 | 600 | 200 | 300 |
| 6 | 200 | 300 | 300 | 600 | 100 | 300 |
| 5 | 100 | 300 | 300 | 600 | 50 | 300 |
| 4 | 50 | 300 | 300 | 600 | 25 | 300 |
| 3 | 25 | 300 | 300 | 600 | 12.5 | 300 |
| 2 | 12.5 | 300 | 300 | 600 | 6.25 | 600 |
| 1 | / | / | 300 | 300 | 0 | 300 |
操作步驟
1.使用前，將所有試劑充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
2.根據(jù)實驗孔數(shù)量，確定所需的板條數(shù)目，剩余板條放回含干燥劑的鋁箔袋，密封。
3. 加樣：每孔加入10uL 裂解液，再加入90uL 標準品、樣品稀釋工作液、陰性對照至相應孔中。用封板膜封板后置 37℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱，200-300rpm，溫育60分鐘。
4. 洗滌：棄去各孔內(nèi)液體，用1XPBST洗滌液注滿微孔（300μL/孔），靜置 30 秒后棄去孔內(nèi)液體；重復3次，每一次洗板完成后在濾紙上拍干。
5. 加生物i素檢測抗體工作液：每孔加生物i素檢測抗體工作液 100uL，用封板膜封板后置 37℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱，200-300rpm，溫育 60 分鐘。
6. 洗滌：棄去各孔內(nèi)液體，用1XPBST洗滌液注滿微孔（300uL/孔），靜置 30 秒后棄去孔內(nèi)液體；重復3次，每一次洗板完成后在面巾紙上拍干。
7. 加酶結合物工作液: 每孔加酶結合物工作液 100uL，用封板膜封板后置 37℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱，200-300rpm，溫育 60分鐘。
8. 洗滌：棄去各孔內(nèi)液體，用1XPBST洗滌液注滿微孔（300uL/孔），靜置 30 秒后棄去孔內(nèi)液體；重復3次，每一次洗板完成后在面巾紙上拍干。
9. 顯色：每孔分別加底物顯色液A50uL，底物顯色液B50uL，輕微振蕩混勻后用封板膜封板置 25℃避光顯色 10 分鐘。
10. 測定：每孔加終止液50uL，輕微混勻。選擇酶標儀主波長450nm，參考波長630nm，測定各孔吸光值（OD 值）。
結果處理
本產(chǎn)品建議采用四參數(shù)的擬合方式進行線性擬合及計算。
1. 標準曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實際測定為準）
| 標準品濃度(pg/mL) | O D 值 ( 1 ) | O D 值 ( 2 ) | 平均值 |
| 200 | 2.846 | 2.841 | 2.844 |
| 100 | 1.965 | 1.979 | 1.972 |
| 50 | 1.110 | 1.189 | 1.150 |
| 25 | 0.636 | 0.582 | 0.609 |
| 12.5 | 0.362 | 0.338 | 0.350 |
| 6.25 | 0.213 | 0.204 | 0.209 |
| 0 | 0.061 | 0.059 | 0.060 |
2. 以標準品理論濃度與對應OD值進行四參數(shù)擬合，得到標準曲線（如下圖所示）
本試劑僅用于檢測樣本中 P24 蛋白組分的含量。
1. 若檢測具有極i高水平p24 蛋白的樣本。含有高水平 p24（即>200pg/mL）的樣品必須在測定前進行稀釋，以獲得準確的p24 值。這類樣本可能包括慢病毒上清，通常慢病毒粗毒液建議稀釋 5000-40000 倍，成品建議稀釋 40000-160000倍。首i次檢測建議進行至少3個連續(xù)倍數(shù)的稀釋，以在標準曲線范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個稀釋后樣品。在進一步分析或稀釋前，需充分混合稀釋液。每份樣品重復分析兩次，以確定原始樣品中正確的 p24 值。
2. 試劑按標簽說明儲存，使用前室溫（18~25℃）平衡。
3. 預包被酶標板使用前，請平衡至室溫（18~25℃）再打開外包裝袋，實驗中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個月。其余不用試劑應包裝好或蓋好。
4. 標準品、生物i素及酶結合物體積量很小，使用前請短暫離心，以使管壁或管蓋的液體沉積到管底。
5. 實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
6. 使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應應充分混勻或搖勻?qū)嶒灲Y果尤為重要。
7. 洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應孔中吸水。
8. 底物顯色液對光敏感，避免長時間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結果。
9. 本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請在效期內(nèi)使用。
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