RAW264.7+GFP 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

細胞描述

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。

細胞特性

1） 來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞

2） 形態(tài)：不規(guī)則圓形，紡錘狀，貼壁細胞，少量懸浮。

3） 含量：>1x106  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細胞，隨細胞傳代次數(shù)的增加，其GFP熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。

建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

RAW264.7+GFP 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）半貼細胞或貼壁不牢（懸?。┘毎?/span>T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。 

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1） 準備DMEM(包含2mM L-，0.11g / L丙酮酸鈉)培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %；P/S 1%。

2） 注意事項：

（a）在細胞生長的初始階段，細胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有“偽足"延伸。隨著培養(yǎng)時間的增加，細胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度，會有細胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細胞會同時出現(xiàn)。

（b）該細胞傳代時不需要用消化。傳代時，用無菌細胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。（c）該細胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應收集起來，離心后細胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。

（d）血清質(zhì)量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應選用高質(zhì)量的胎牛血清。

3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理

1）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

該細胞用細胞刮鏟替代來對細胞進行處理。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yǎng)表面將細胞刮落，收集細胞后離心去上清，重懸后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內(nèi)。收貨后第一次傳代1:2進行，后續(xù)可以根據(jù)實際的情況以1:2~1:4的比例進行傳代。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。