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            目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>ATCC細(xì)胞>>ATCC原裝細(xì)胞系>> YS006C3T3成纖維細(xì)胞ATCC

            3T3成纖維細(xì)胞ATCC
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            參考價 1800
            訂貨量 ≥1
            具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
            1800
            ≥1
            具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
            • 品牌 ATCC
            • 型號 YS006C
            • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
            • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
            • 所在地 上海市
            屬性

            $NV_PropertyInfoName.SubString(0,25)

            >

            更新時間:2024-10-20 20:54:19瀏覽次數(shù):1371評價

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            供貨周期 一周 規(guī)格 T25瓶/2冷凍管
            貨號 YS006C 主要用途 科研實驗
            3T3成纖維細(xì)胞ATCC,雅吉生物細(xì)胞ATCC引種,代次靠前,細(xì)胞活率高狀態(tài)好,售后完善,更多細(xì)胞系,原代細(xì)胞和培養(yǎng)試劑歡迎新老客戶咨詢訂購

            細(xì)胞名稱:3T3成纖維細(xì)胞ATCC

            細(xì)胞代次:P4

            細(xì)胞規(guī)格:T25瓶(包郵)/2冷凍管(需加干冰運輸費)

            細(xì)胞凍存:無血清凍存液

            細(xì)胞傳代:第一次建議1:2

            細(xì)胞收到后處理

            培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞,消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張)前三天照片重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進行對比培養(yǎng)

            培養(yǎng)步驟

            細(xì)胞傳代如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度80%,即可進行傳代培養(yǎng)傳代具體步驟如下細(xì)胞傳代:

            A1、對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

            方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

            方法:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

            A2、懸浮細(xì)胞凍存:

            1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

            離心5min;

            2、棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液(C7001),混勻后加入凍存管中。(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液即可)

            3、將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱存

            24 小時以上。

            B1、對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考如下方法:

            1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

            2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

            3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)重懸

            4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入到37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

            B2、貼壁細(xì)胞凍存:

            1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

            2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

            3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

            細(xì)胞復(fù)蘇:

            1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

            2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

            3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種T25培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

            4、第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

            ATCC.png

            注意事項:有些細(xì)胞比較特殊,如貼壁不牢,在運輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落,這是正?,F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5min,收集上清作過渡培養(yǎng)(后期對比培養(yǎng)),沉淀加入消化液1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代(兩個T25),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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