土壤β-木糖苷酶（Solid-β- xylosidase, S-β-XYS）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法 100T/48S
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類(lèi)半纖維素降解的關(guān)鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
測(cè)定原理：
S-β-XYS 催化對(duì)硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對(duì)硝基苯酚，對(duì)硝基苯酚在 405nm 處有特征吸收峰，測(cè)定405nm 光吸收增加速率，可計(jì)算S-β-XYS 活性。
組成：
產(chǎn)品名稱(chēng) | BO6095-100T/48S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 1ml | 4℃避光 |
試劑二：液體 | 10ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 10ml | 4℃ |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
自備儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。
粗酶液提取：
約 0.1g 鮮土或風(fēng)干土樣，加入 1ml 提取液進(jìn)行冰浴勻漿，室溫振蕩提取 30min，然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清待測(cè)。
測(cè)定操作表：
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 405nm。
2、操作表
| 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
樣本（μl） | 40 | 40 |
| 試劑一（μl） |
| 10 |
|
試劑二（μl） | 80 | 70 |
混勻，45℃水浴 20min |
試劑三（μl） | 80 | 80 |
混勻，靜置 5min，405nm 處測(cè)定吸光值A，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管 設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 |
β-木糖苷酶活性計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA。酶活定義：每克土樣每天催化產(chǎn)生 1μmol 對(duì)硝基苯酚的酶量為一個(gè)酶活單位。
β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T
=16.33×(ΔA-0.0011)÷W
V 樣總：加入提取液體積，1ml； V 反總：反應(yīng)總體積，0.12ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04ml； W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min=1/72d；
b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=6.613x+0.0011，R2=0.9998；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA酶活定義：每克土樣每天催化產(chǎn)生 1μmol 對(duì)硝基苯酚的酶量為一個(gè)酶活單位。
β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土樣）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T
=32.66×(ΔA-0.0011)÷W
V 樣總：加入提取液體積，1ml； V 反總：反應(yīng)總體積，0.12ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04ml； W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min=1/72d；
ΔA 控制在 0.01-1 范圍內(nèi)，若ΔA 大于 1，可適當(dāng)減小樣本量。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍為：0.01μmol/ml-0.5μmol/ml。
