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產品特點：

• 在寬的RNA起始量范圍內，RT-qPCR結果的一致性更高，cDNA合成效率更高
• 方便的預混液形式，可降低移液差異
• 包含用于RT-qPCR的dsDNase和no-RT對照，可控制RNA制備中的gDNA污染風險

技術細節(jié)：

• 在96-基因檢測板陣列中，cDNA合成效率始終較高
• 在較寬的動態(tài)范圍（1 pg-1 μg的總RNA）內，cDNA合成呈更高線性度
• 在42°C-55°C的反轉錄過程中保持完整的酶活性

在較寬的動態(tài)范圍內具有高轉錄效率

Maxima H Minus cDNA合成預混液可在較寬的模板濃度范圍內保持高轉錄效率和良好的線性（圖1）。良好的線性表明，無論使用大量還是少量起始RNA，都能可靠代表不同轉錄物的相對數量。

圖1. Maxima H Minus cDNA合成預混液的廣泛動態(tài)范圍。標準曲線在寬的起始RNA范圍內具有高度線性度（R2 = 0.999），這表明無論總RNA豐度是多少，特定RNA轉錄物的相對代表性在cDNA庫中得以保留。將HeLa細胞總RNA進行10倍連續(xù)稀釋（1 μg至0.1 pg），然后對人18S RNA基因進行擴增。使用Maxima H Minus cDNA合成預混液生成鏈cDNA。使用Thermo Scientific Luminaris Probe qPCR預混液（低ROX），在Applied Biosystems ViiA 7實時PCR系統(tǒng)上擴增cDNA。
 

一致的轉錄效率

在使用少量和大量起始RNA時，Maxima H Minus cDNA合成預混液都比其他品牌的反轉錄酶具有更高的效率（圖2）。轉錄效率越高，RNA使用量越少，并且能夠準確檢測低表達的轉錄物。

圖2. Maxima H Minus cDNA合成預混液的轉錄效率更強。在廣泛的RNA起始量范圍內，Maxima H Minus cDNA合成預混液比其他品牌的反轉錄酶具有更高的效率。將HeLa細胞總RNA進行10倍連續(xù)稀釋（1 μg to 0.1 pg），然后對人18S RNA基因進行擴增。使用Maxima H Minus cDNA合成預混液、用于RT-qPCR 的Thermo Scientific Maxima鏈cDNA合成試劑盒以及來自其他四家供應商的反轉錄酶，生成鏈cDNA。使用Luminaris Probe qPCR預混液（低ROX），在ViiA 7實時PCR系統(tǒng)上擴增cDNA。擴增曲線表示ΔRn隨循環(huán)數的變化。
 

對靶標陣列實現一致、可靠的轉錄

使用Maxima鏈cDNA合成試劑盒得到的RT-qPCR數據進行歸一化處理后發(fā)現，在RT-qPCR中96個靶基因中，Maxima H Minus cDNA合成預混液始終比其他供應商的反轉錄酶預混液具有更高的效率（圖3）。

圖3. C_t值一致降低。在廣泛的靶標范圍內，Maxima H Minus cDNA合成預混液比其他市售預混液具有更高的cDNA合成效率。使用96基因Applied Biosystems TaqMan®檢測板和100 ng HeLa總RNA起始量，將Maxima H Minus cDNA合成預混液與Thermo Scientific Maxima First Strａnd cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR以及其他品牌的預混液進行比較。以Maxima First Strａnd cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR作為對照，得到檢測板中96個基因的ΔCt值（ΔC_t = Maxima H Minus cDNA 合成預混液或其他市售產品的C_t – 用于RT-qPCR 的Maxima First Strａnd cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR的C_t）。

完整的cDNA合成工作流程解決方案

Maxima H Minus cDNA合成預混液具有雙鏈特異性DNA酶（dsDNase），與傳統(tǒng)DNase I相比，可更快、更高效和更地去除gDNA。dsDNase處理的RNA樣品未顯示出RNA完整性和數量的降低。在cDNA合成之前使用dsDNase處理，可限度降低使用傳統(tǒng)DNase I凈化樣品帶來的損失風險。

Maxima No-RT 對照混合物將與Maxima H Minus反轉錄酶預混液一起提供，從而為2步法RT-qPCR提供完整的cDNA合成解決方案。這種No-RT 對照混合物包含反轉錄預混液中除Maxima H Minus反轉錄酶以外的所有成分，使研究人員能夠準確確定無殘留的gDNA污染。

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