諾博萊德 兔SP檢測試劑盒 SP法

NobleRyder SP8809 兔SP檢測試劑盒SP Kit(Rabbit)

產(chǎn)品貨號：SP8809

產(chǎn)品名稱：兔SP檢測試劑盒SP Kit(Rabbit)

英文名稱：SP Kit(Rabbit)

產(chǎn)品規(guī)格：3ml ; 6ml ; 18ml ; 110ml

產(chǎn)品簡介：

別名：兔SP試劑盒/兔SP免疫組織化學(xué)試劑盒/兔SP超敏免疫組化試劑盒

儲存條件：-20℃，avoid light，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder SP8809 兔SP檢測試劑盒SP Kit(Rabbit)適合于一抗為兔IgG的免疫組化實驗DAB顯色。

SP 試劑盒是專為免疫組化和其他免疫檢測而設(shè)計的，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，同親和素一樣，對生wu素有極gao的親和力，親和素是一個堿性蛋白質(zhì)（PI=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點接近中性，對組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，因此基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。

操作步驟:（以石蠟切片為例）

1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯，三次乙醇)。

2. 3% H2O2 室溫處理5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。

3.可選步聚：

a、熱修復(fù)抗原，將切片浸入0.01M檸檬酸鈉緩沖液（PH6.0），電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10分鐘后，反復(fù)1-2次。冷卻后PBS（pH7.2-7.6）洗滌1-2次。

b、酶消化，滴加消化液，37℃10分鐘，PBS（pH7.2-7.4）洗滌2-3次。

c、跳過此步，直接進(jìn)入下一步。

4.  滴加封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體，免洗。

5.  用稀釋液將一抗按一定比例稀釋（稀釋后的一抗4℃可保存一周），也可另行購買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗37℃ 孵育1小時左右或20℃ 2小時左右，也可4℃過夜。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次 2 分鐘。（一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來說，陽性染色強(qiáng)度不夠時，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時間；背景過高時，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時間。）

6． 根據(jù)用量，用稀釋液將Bio-羊抗兔IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul Bio-羊抗兔IgG濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗兔IgG工作液，20-37℃ 孵育30分鐘。PBS（pH7.2-7.4）洗滌3次，每次2分鐘。

7．根據(jù)使用量，用稀釋液將鏈酶親和素-POD 濃縮液按 1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入 10ul

鏈酶親和素-POD濃縮液混勻，此工作液4℃可保存一周)。滴加鏈酶親和素-POD工作液，20-37℃，

30 分鐘。PBS （pH7.2-7.4）洗滌4次，每次5分鐘。

8．DAB顯色：根據(jù)用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB顯色液A，加入50ul 20×DAB 顯色液B 。充分混勻后滴加到切片上。室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時間，一般在5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。

9．蘇木素輕度復(fù)染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。

對于細(xì)胞爬片，固定后，PBS漂洗兩次，再用0.5% Triton X-100室溫孵育20分鐘，PBS漂洗兩次，3% H2O2處理15分鐘；PBS漂洗兩次，接上述第4步。

對于冰凍切片，固定后，PBS漂洗兩次，接上述第二步。

注意事項：

如果染色背景過高，在SP反應(yīng)之后，DAB顯色之前，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗滌切片4次，PBS洗2次，然后DAB顯色。

 兔SP檢測試劑盒 SP法

產(chǎn)品訂購信息

SP8809 兔SP檢測試劑盒SP Kit(Rabbit)  3ml ; 6ml ; 18ml ; 110ml