NobleRyder M0148 抗體純化磁珠 Protein A Matrix Antibody Purification Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：M0148

產(chǎn)品名稱：抗體純化磁珠 Protein A Matrix Antibody Purification Kit

產(chǎn)品規(guī)格：1mL/5mL

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder M0148 抗體純化磁珠 Protein A Matrix Antibody Purification Kit是利用蛋白偶聯(lián)技術(shù)使ProteinA（orA/G）共價(jià)包被到 NHS 活化的超順磁性微球表面。該產(chǎn)品具有更高的抗體結(jié)合能力和較低的蛋白非特異吸附率，洗脫條件更均一，一步純化即可從血清樣品中分離出純度大于90%的抗體。

本產(chǎn)品為納米級(jí)磁性微球，具有超大比表面積，可大幅度縮短抗體吸附所需的時(shí)間，熟練操作可在 15min 內(nèi)完成抗體吸附過(guò)程，30min 內(nèi)完成抗體純化流程?？贵w純化磁珠試劑盒配有經(jīng)過(guò)優(yōu)化的預(yù)制緩沖液，為抗體純化實(shí)驗(yàn)提供了最佳的反應(yīng)條件，增強(qiáng)了抗體純化實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。

適用范圍：

本產(chǎn)品可重復(fù)使用，適用于血漿、腹水、組織培養(yǎng)上清液等樣品中的抗體純化，也可用于抗體固定及其它相關(guān)研究。

抗體純化磁珠-常備現(xiàn)貨

操作步驟（僅供參考）

不同種類的免疫磁珠具有不同的抗體結(jié)合能力，在執(zhí)行抗體純化操作之前，操作者應(yīng)首先估算待純化樣品中的抗體含量（一般血清樣品中抗體含量約 2~8mg/mL，細(xì)胞培養(yǎng)物中抗體濃度因表達(dá)量不同而變化較大）；然后根據(jù)所選免疫磁珠的抗體結(jié)合能力（見免疫磁珠相關(guān)產(chǎn)品列表或者產(chǎn)品組成的 AntibodyCapacity 數(shù)據(jù)），計(jì)算免疫磁珠的大概用量，免疫磁珠用量過(guò)多或過(guò)少均影響抗體純化的效果，建議免疫磁珠用量的最大載量應(yīng)為樣品抗體含量的 80%~100%。

以下操作步驟按照純化抗體，取用 100µLProteinA 抗體純化磁珠為例進(jìn)行詳細(xì)描述。操作者可以參照以下步驟中各種緩沖液的用量及容器大小，按比例調(diào)整實(shí)際操作中各成分的用量。

1、樣品處理：取抗體含量約為 0.1~0.15mg 的樣品置于新的 1.5mLEP 管中，加入抗體結(jié)合緩沖液（②） 至總體積為 500µL（如樣品體積大于 500µL 則無(wú)需加入），混合均勻。

2、、磁珠預(yù)處理：將抗體純化磁珠（①）漩渦振蕩 30s，使磁珠充分重懸；取 100µL 磁珠懸液置于另一新的 1.5mLEP 管中。對(duì)磁珠懸液進(jìn)行磁性分離（將 EP 管放置于磁性分離器）上，使磁珠吸附在管壁至溶液澄清；該操作描述以下省略，棄上清液。從磁性分離器上取下 EP管。用抗體結(jié)合緩沖液（②）洗滌 2 次，棄上清液，管中磁珠可直接用于抗體分離）。

3、抗體吸附：在步驟 2 預(yù)處理的磁珠管中加入步驟 1 處理的樣品溶液，漩渦振蕩均勻，在室溫下（約25℃）置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn) EP 管，促使樣品和磁珠充分接觸并吸附，翻轉(zhuǎn)約 15min 后進(jìn)行磁性分離，移棄上清液。

4、磁珠洗滌：向 EP 管中加入 1mL 抗體結(jié)合緩沖液（②），振蕩重懸磁珠后進(jìn)行磁性分離，移棄上清液； 該操作重復(fù) 3 次。

5、抗體洗脫（方式 1-高鹽弱酸性洗脫）：

1） 抗體洗脫：在步驟 4 完成磁珠洗滌的 EP 管中加入 0.5~1.0mL 抗體洗脫緩沖液（③），用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下（約 25℃）置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn) EP 管，翻轉(zhuǎn) 10min 后進(jìn)行磁性分離，收集上清液至新的 EP 管；

2） 抗體透析： 因抗體洗脫緩沖液（③）含有較高濃度的鹽分，收集的抗體溶液不能直接用于 SDS-PAGE 檢測(cè)，但可以用抗體洗脫緩沖液調(diào)零進(jìn)行抗體濃度測(cè)定?？贵w洗脫緩沖液呈偏酸性（pH4.5）， 建議操作者用自行配制的中性低鹽溶液（即透析液）立即對(duì)收集的抗體溶液進(jìn)行透析處理，以降低抗體失活率，獲得較高活性和穩(wěn)定性的抗體溶液。

6、抗體洗脫（方式 2-低 pH 洗脫）：

1）抗體洗脫：在步驟 4 完成磁珠洗滌的 EP 管中加入 0.5~1.0mL 抗體洗脫緩沖液（④），用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下（約 25℃）置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)EP 管，翻轉(zhuǎn) 10min 后進(jìn)行磁性分離，收集上清液至新的 EP 管；

2）抗體中和： 因抗體洗脫緩沖液（④）pH 值較低，收集的抗體溶液需要立即加入一定量的抗體中和緩沖液（⑤），一般為收集抗體溶液體積的 1/20~1/10，最終使洗脫的抗體溶液 pH值保持中性環(huán)境，以降低抗體失活率，獲得較高活性和穩(wěn)定性的抗體溶液。收集的抗體可直接用于SDS-PAGE 檢測(cè)及抗體濃度的測(cè)定。

7、磁珠后處理：使用后的磁珠用磁珠洗滌緩沖液（⑥）進(jìn)行重懸，然后執(zhí)行磁性分離，棄上清液， 重復(fù)操作一次；加入 100µL 磁珠儲(chǔ)存緩沖液（⑦），置于 2~8℃保存。

磁珠再生

1、磁珠多次使用后會(huì)有沉淀蛋白、強(qiáng)疏水性蛋白、脂蛋白等雜質(zhì)非特異性吸附到磁珠上，為了保證磁珠的使用效率，建議持續(xù)使用 5 次后進(jìn)行磁珠再生處理。

2、、按約 1mL 磁珠 5mL 的比例加入磁珠再生緩沖液（⑧），振蕩均勻，在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)混合，10min 后進(jìn)行磁性分離，棄上清液。

3、按約 1mL 磁珠 5mL 的比例加入磁珠洗滌緩沖液（⑥）進(jìn)行重懸，然后執(zhí)行磁性分離，棄上清液，重復(fù)以上操作兩次。

4、按照約 1mL 磁珠1mL 的比例加入適量磁珠儲(chǔ)存緩沖液（⑦），置于 2~8℃保存。

注意事項(xiàng)

1、進(jìn)行抗體純化操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本操作說(shuō)明書。

2、本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用。

3、磁珠使用前應(yīng)充分振蕩均勻。

4、磁珠應(yīng)保存在儲(chǔ)存溶液中，防止干燥。

5、請(qǐng)勿將磁珠冷凍或離心，以免引起不可逆聚集。

6、本產(chǎn)品僅供研究使用。

抗體純化磁珠-常備現(xiàn)貨

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