91免费精品国自产拍在线不卡,久久性生大片免费观看性,亚洲成在人线av,男女天天射天天干网站,欧美一区二区三区四区视频,亚洲黄视频在线观看,国产123 ,国产成人无码a区在线播放_久久久久久高清一级毛片免费_台湾亚洲自偷自拍另类12p_亚洲国产精品日韩专区av_高潮爽死抽搐白浆Av迷 ,亚洲2020年精品自在自线_国产精品无码无卡在线观看_人人妻人人添人人爽日韩欧美_无码人妻一区二区三区蜜桃手机版

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	1mL / 5mL
貨號(hào)	FQ-PCR06	應(yīng)用領(lǐng)域	環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途	是使用SYBR Green I嵌合熒光法進(jìn)行qPCR的2×試劑。

諾博萊德染料法qPCRMix

染料法qPCRMix 熒光定量

產(chǎn)品名稱：染料法qPCRMix
產(chǎn)品內(nèi)容：

組分	FQ-PCR06-1	FQ-PCR06-5
2× miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix	1 mL	4×1.25 mL
DNase-free Water	1 mL	4×1.25 mL

產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2× miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix是使用SYBR Green I嵌合熒光法進(jìn)行qPCR的2×試劑。主要成分包括化學(xué)修飾的Hot Start Fast Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg²⁺、SYBR Green I和針對(duì)qPCR優(yōu)化的最適Buffer。本產(chǎn)品可在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好、可信度高。另外，預(yù)混液體系中添加了特殊ROX Reference Dye，適用于不同qPCR 儀器，配置反應(yīng)體系時(shí)只需加入引物和模板即可擴(kuò)增，適用于動(dòng)物、植物等miRNA的染料法熒光定量PCR。
注意事項(xiàng)
1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2. 請(qǐng)于使用前確保產(chǎn)品wan全解凍，che底混勻后短暫離心，置于冰上備用。
3. 反復(fù)凍融會(huì)影響產(chǎn)品性能。如每次用量較少，推薦小份分裝使用。
4. 本產(chǎn)品中含熒光染料SYBR Green I，使用中應(yīng)盡量避免強(qiáng)光照射。
實(shí)驗(yàn)流程
配制檢測(cè)試劑

按照下表配置PCR反應(yīng)體系（注：配置多個(gè)反應(yīng)孔時(shí)，請(qǐng)為各組分預(yù)留10%的余量，以免移液損失。）

試劑組份	20μL體系	50μL體系
2× miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix	10 μL	25μL
Forward Primer (10μM)	0.4 μL*	1μL*
Reverse Primer (10μM)	0.4 μL*	1μL*
模板DNA/cDNA	X μL*	X μL*
DNase-free Water	As required	As required
Total Volume	Up to 20 μL	Up to 50 μL

*通常每條引物終濃度為0.2 μM，也可根據(jù)情況在0.1~0.4μM 間進(jìn)行調(diào)整。
*微量體積加樣時(shí)誤差大，建議模板稀釋后再加入反應(yīng)體系中，這樣可以有效提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性；如模板類型為未稀釋cDNA原液，使用體積不應(yīng)超過(guò)qPCR反應(yīng)總體積的 1/10。
2. 反應(yīng)體系配好后，蓋好反應(yīng)蓋，充分渦旋混勻，離心，避免產(chǎn)生氣泡。
反應(yīng)程序設(shè)置

Stage	步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
Stage 1	預(yù)變性/酶激活*	95 ℃	5 min	1
Stage 2	變性	95 ℃	15 sec	40
Stage 2	退火/延伸/采集信號(hào)*	60 ℃	40 sec	40
Stage 3	熔解曲線*	儀器默認(rèn)程序		1

*延伸時(shí)間請(qǐng)根據(jù)您使用的Real Time qPCR儀數(shù)據(jù)采集最短時(shí)間限制以及PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度自行調(diào)整。
結(jié)果分析
定量檢測(cè)至少需要三個(gè)生物學(xué)重復(fù)，反應(yīng)結(jié)束后需要確認(rèn)擴(kuò)增曲線的線形，熔解曲線的峰形。
1. 擴(kuò)增曲線：標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線為S型。
Ct值小于10，需要將模板稀釋后，重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（每稀釋一倍，Ct值增大1）；
Ct值30-35之間時(shí)，需要提高模板濃度，或者增大反應(yīng)體系的體積，以提高擴(kuò)增效率，保證結(jié)果分析的準(zhǔn)確性；
Ct值大于35時(shí)，檢測(cè)結(jié)果不可信。
2. 熔解曲線：
熔解曲線單峰，表明反應(yīng)特異性好可以進(jìn)行定量結(jié)果分析；若熔解曲線出現(xiàn)明顯雙峰或者多峰，則不能進(jìn)行定量分析，需要重新設(shè)計(jì)引物。
常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案
?擴(kuò)增曲線形狀異常
①擴(kuò)增曲線不光滑：確認(rèn)所用ROX與機(jī)型是否匹配; 使用的八聯(lián)排管或PCR板可能與設(shè)備不匹配。
②擴(kuò)增曲線突然驟降：反應(yīng)管內(nèi)留有氣泡。樣本離心后仔細(xì)檢查反應(yīng)管內(nèi)是否有氣泡殘留。
?反應(yīng)結(jié)束無(wú)擴(kuò)增曲線出現(xiàn)
①循環(huán)數(shù)不夠：一般設(shè)置為40個(gè)循環(huán)。
②確認(rèn)程序中是否設(shè)置了信號(hào)采集步驟。
③確認(rèn)引物、模板是否降解。
④確認(rèn)是否添加了ROX，嘗試將Passive Reference 設(shè)置為None，再重新分析數(shù)據(jù)。
?陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增
①反應(yīng)體系污染：更換新的Mix、水、引物重復(fù)實(shí)驗(yàn)。在超凈工作臺(tái)進(jìn)行反應(yīng)體系配置，減少氣溶膠污染。
②產(chǎn)生引物二聚體，配合溶解曲線進(jìn)行分析。
③使用含UDG/dUTP 防污染體系的擴(kuò)增試劑。
?實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差
①加樣體積失準(zhǔn)：建議使用大體積加樣以減少誤差。
②模板濃度太低：模板濃度越低，重復(fù)性越差，減少模板稀釋倍數(shù)或增加模板體積。
③反應(yīng)體系未充分混勻：上機(jī)檢測(cè)前將反應(yīng)體系充分混勻后再離心。