乙醛tuo氫酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

乙醛tuo氫酶試劑盒 輔酶Ⅰ

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

乙醛tuo氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種，廣泛存在于各種動(dòng)物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸，在酒精代謝中起主要作用。在人類(lèi)和許多動(dòng)物體內(nèi)，線粒體乙醛tuo氫酶能把對(duì)生物體有害的醇類(lèi)轉(zhuǎn)化，所以在細(xì)胞解毒研究中乙醛tuo氫酶受到高度關(guān)注；同時(shí)，乙醛tuo氫酶在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測(cè)方面有較廣泛的研究應(yīng)用。

測(cè)定原理：

在輔酶Ⅰ存在的條件下，乙醛tuo氫酶催化乙醛和 NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH，在 340nm 處的吸光值會(huì)增加，測(cè)定 340nm 處的吸光值變化，可計(jì)算得到乙醛tuo氫酶的活性。

組成：

自備儀器和用品：

天平、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)、1ml 石英比色皿、蒸餾水。

ALDH 提取：

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后，10000g，4℃，離心 20min。

細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

液體：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表：

ALDH 酶活計(jì)算：

按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。

ALDH 酶活（nmol/min/mg prot）=

按樣本質(zhì)量計(jì)算

?A ×V 反總÷（V 樣×Crp）÷T= 804×△A÷Cpr

?? d

酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。

ALDH 酶活（nmol/min/g 鮮重）=

按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

?A ×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T = 804×△A÷W

?? d

酶活定義：每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。

ALDH 酶活（nmol/min/104cell）=數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

按液體體積計(jì)算

?A ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)））÷T= 804×△A÷細(xì)胞

?? d

酶活定義：每ml 樣本每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個(gè)酶活單位。

ALDH 酶活（nmol/min/ml）=

?A ×V 反總÷V 樣÷T= 804×△A

?? d

?：NADH 微摩爾消光系數(shù)，6.22×10-3 L/µmol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積，1ml；

V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.2ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g，T：反應(yīng)時(shí)間：1min

乙醛tuo氫酶試劑盒 輔酶Ⅰ