α-淀fen酶（α-amylase，α-AL）試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

α-淀fen酶試劑盒 淀粉系列

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義 V

淀fen酶負(fù)責(zé)水解淀粉，包括α-淀fen酶和β-淀fen酶。α-淀fen酶(EC 3.2.1.1)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時(shí)使淀粉的粘度降低，因此又稱(chēng)為液化酶。

測(cè)定原理：

還原糖還原 3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀fen酶不耐熱，在 70℃鈍化 15min，從而測(cè)定α-淀fen酶活性。

組成：

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

粗酶液制備：

組織：稱(chēng)取 0.1~0.2g 樣本（建議稱(chēng)取約 0.1g 樣本），加 1 mL 蒸餾水勻漿；將勻漿倒入離心管中，在室溫下放置提取 15min，每隔 5min 振蕩 1 次，使其充分提取；3000g，25℃離心 10min，吸取上清液并且加蒸餾水定容至 10 mL，搖勻，即為淀fen酶原液。

血清（漿）：直接檢測(cè)。

操作步驟和加樣表（在 1.5mLEP 管中依次加入下列試劑）：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 540 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、試劑一或試劑二 40℃預(yù)熱 10min

3、測(cè)定步驟

70℃水浴 15min 左右，冷卻

在 40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫 5min

混勻，95℃水浴 5min，冷卻， 540nm 處讀取對(duì)照管和測(cè)定管吸光度，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。

α-淀fen酶活性計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778； x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、α- 淀fen酶活性

按照樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/g 鮮重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=1.075×(ΔA＋

0.1778)÷W

按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷（V 樣×Cpr）÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778)÷Cpr

血清（漿）樣本中α- 淀fen酶活性計(jì)算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位。

α- 淀fen酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷V 樣÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25 mL；V 樣總：提取液總體積，10 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，5min。

α-淀fen酶試劑盒 淀粉系列