組織無機磷含量測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

組織無機磷含量測定試劑盒 離子系列

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

無機磷主要指磷酸根，參與生物體內(nèi)多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等等，此外促進碳水化合物的合成、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)運。

測定原理：

鉬藍與磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物質(zhì)，通過測定 660nm 光吸收可計算無機磷含量。

組成：

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 20 ml 蒸餾水，充分溶解后加入試劑二（全部），混勻。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1ml 玻璃比色皿和蒸餾水。

無機磷提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定：

分光光度計預熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。

空白管：取EP 管，依次加入 500μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為A 空白管。

標準管：取 EP 管，依次加入 50μl 標準液，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為A 標準管。

測定管：取 EP 管，依次加入 50μl 上清液，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為A 測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

組織無機磷含量計算公式：

按照蛋白含量計算

無機磷含量(μmol/mg prot)= [C 標準液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]×V 總÷Cpr

=1×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)÷Cpr

按照樣本質(zhì)量計算

無機磷含量(μmol/g )= [C 標準液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]×V 總÷W

=1×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)÷W

C 標準液：1mmol/L；V 總：上清液總體積，1ml=0.001 L；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量， g。

注意事項：

試劑三需臨用前配制，并且當天使用完畢。

40min 內(nèi)完成比色。

最di檢出限為 10μmol/L。

組織無機磷含量測定試劑盒 離子系列