諾博萊德 全血RNA快速提取試劑盒 (免lv仿)

FlashPure Blood Total RNA Mini Kit血液總 RNA 提取試劑盒（離心柱型）

目錄號：91016

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇、β-巰基乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個月，不影響使用效果。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

適用于快速提取新鮮血液的總RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測序、RACE等。

產(chǎn)品特點

1. 高效：提取全過程僅需 20 min！

2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

操作步驟

提示：所有離心步驟均需要在室溫（15 ~37℃）下進(jìn)行。

① 第一次使用前，請先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指ding量無水乙醇。

② 操作前，用 RNase-Free H2O 將 10X 紅細(xì)胞裂解液 RLB 稀釋到 1X。

③ 操作前，在裂解液 RLT 中加入 β-巰基乙醇至終濃度 1%，如 1ml RLT中加入 10μl β-巰基乙醇。此裂解液最好現(xiàn)用現(xiàn)配。配好的 RLT 4℃可放置一個月。

1. 在適合大小的 RNase free 離心管中加入 1 體積（<1.5 ml）加入各種抗凝劑新鮮血液 (顛倒混勻后)和 3 體積的紅細(xì)胞裂解液 RLB，顛倒混勻，可輕彈管壁,確?；靹?。

2. 室溫放置 10 分鐘（期間應(yīng)該顛倒輕彈混勻數(shù)次幫助裂解紅細(xì)胞）。

注意：如果 RNA 降解嚴(yán)重，可在冰上裂解，時間可以長一些以充分裂解。

3. 12,000 rpm 離心 20 秒，倒棄紅色上清，并小心的盡可能多的吸棄上清

（注意不要吸到管底的細(xì)胞團(tuán)），留下完整的管底白細(xì)胞團(tuán)。

注意：離心后在管底應(yīng)該見到白色的白細(xì)胞團(tuán)，也可能有一些紅細(xì)胞殘片和白細(xì)胞團(tuán)在 一起，但是如果看到的是大部分的紅色細(xì)胞團(tuán)，說明紅細(xì)胞裂解很不充分，應(yīng)該再加入紅細(xì)胞裂解液，重懸后重復(fù)步驟 2，3。

注意：上清盡可能的吸棄，殘留過多會稀釋裂解液，造成裂解結(jié)合異常，產(chǎn)量純度降低。

4. 渦旋或者輕彈管壁將白細(xì)胞沉淀完ding松散重懸，加入 350 μl（< 0.5 ml全血）或者 600 μl（0.5~1.5ml 全血）裂解液 RLT，吹打混勻后用手劇烈振蕩 20 秒，充分裂解。

注意：病人正常血樣白細(xì)胞數(shù)量為 4000-7000/μl，如果血樣中白細(xì)胞數(shù)量可能大幅增加，應(yīng)該適當(dāng)減少處理量。或者按照 350 μ（l < 2x106 白細(xì)胞）或者 600 μl（2x106~1x107白細(xì)胞）的比例加裂解液 RLT。

5. 用吸頭吹打混勻幫助裂解，或者劇烈渦旋震蕩，直到得到滿意勻漿結(jié)果。(或者電動勻漿30秒)，可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高產(chǎn)量。

6. 向裂解物中加入等體積（一般 350 μl / 600 μl）的 70%乙醇，吹打混勻。

7. 每次轉(zhuǎn)移≤700 μl 混合物至一個 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min，RNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。重復(fù)此過程，直到溶液全部上柱。

8. 加 700 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

9. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

10. 重復(fù)步驟 9。

11. 將 RNA 吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上乙醇。

12. 取出 RNA 吸附柱，放入一個新的 RNase - free1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加 30-50 μl RNase free H2O（事先在 70-90℃水浴中加熱可提高產(chǎn)量）， 室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

13. 提取的 RNA 可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

全血RNA快速提取試劑盒 (免lv仿)