諾博萊德 真菌總RNA提取試劑盒(帶gDNA過濾器）

Fungus Total RNA Mini Kit真菌總 RNA 提取試劑盒（含 gDNA 過濾器）

目錄號：91515

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15~25℃）下，存放 12 個月，不影響使用效果。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

產(chǎn)品簡介

適用于快速提取各種真菌的總RNA，gDNA過濾器能高效濾除gDNA，提取的RNA，可直接用于RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、普通轉錄組測序、芯片等。

產(chǎn)品特點

1. 無毒：免氯仿、免 β-巰基乙醇！

2. 高效：提取全過程僅需 20 min！

3. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

操作步驟

提示：

所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進行。

第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標簽。

1. 材料處理：

a．轉移 500 μl 裂解液 PRL 和 50 μl 糖酚去除劑 PAD 至 1.5 ml 離心管中，混勻備用。

注意：糖酚去除劑 PAD 是提取多糖、多酚、次級代謝產(chǎn)物多、色素含量豐富的困難樣品不ke或缺的成分。對于簡單樣本，不加糖酚去除劑PAD，RNA 產(chǎn)量可能會提高一些。

b．液氮中研磨真菌組織成細粉，取≤50 mg 細粉轉入上述裝有 PRL 裂解液的離心管中, 劇烈渦旋震蕩 30 sec，充分混勻。放離心管架上，接著研磨下一個樣本。

（冬天氣溫低， 37℃搖床放置 3 min，可增強裂解效果，提高產(chǎn)量）

c． 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

注意：使用1 ml裂解液PRL和100μl糖酚去除劑PAD去裂解 100 mg 樣品，RNA 產(chǎn)量會翻倍。

2. 小心吸取上清（一般 480 μl，注意不要吸到沉淀）轉入一個新的 1.5 ml離心管中，加入 0.5 倍體積（一般 240 μl）的無水乙醇, 吹打混勻。

3. 每次轉移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 過濾器中（過濾器放入收集管）， 13,000 rpm 離心 2 min，倒棄濾液。此時，絕大部分的 gDNA 被濾除，RNA 和少量 gDNA 殘留被吸附在膜上。重復此過程，直到溶液全部轉入 gDNA 過濾器。

4. 取出步驟 3 的 gDNA 過濾器，放入一個新的 2.0ml 離心管中，加入 500μl裂解液 PRL Plus，13,000 rpm 離心 1 min，收集濾液（RNA 在濾液中），加入 250 μl 無水乙醇，吹打混勻。

5. 將濾液混合物轉入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 2 min，此時，RNA被吸附在膜上，倒棄濾液。

6. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

7. 加入 500 μl 漂洗液 RW（檢查是否已加乙醇），13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

8. 重復步驟 7。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙醇。

10. 取出 RNA 吸附柱，放入 1.5 ml RNase-free 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

11.提取的總 RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。

相關產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有 qPCR 儀）

真菌總RNA提取試劑盒(帶gDNA過濾器）