諾博萊德 骨組織總RNA快速提取試劑盒(帶gDNA過濾器）

FlashPure Bone Total RNA Mini Kit骨組織 RNA 快速提取試劑盒(帶 gDNA 過濾器)

目錄號：91514

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃），有效期 12 個月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

骨組織堅硬、骨細(xì)胞密度低、而且外周基質(zhì)含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和 RNA 難以分離，無法用傳統(tǒng) Trizol 法進(jìn)行高質(zhì)量提取。

本產(chǎn)品適用于快速提取骨組織細(xì)胞的總 RNA，利用多年研制而成的骨組織專用裂解液，并添加多種成分去除骨組織蛋白多糖，采用高效的 gDNA 過濾器，不需要繁瑣的 DNase I消化，提取的 RNA，可直接用于 RT、RT-PCR、RACE、RT-qPCR、普通轉(zhuǎn)錄組測序、芯片等。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提取全過程僅需 30min！

注意事項(xiàng)

1. 如果 FSL 有析出或者沉淀，請將其置于 65℃水浴中，重新溶解后使用。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量。

操作步驟：

提示：

① 第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入無水乙醇，加入量詳見瓶身標(biāo)簽。

② 操作前，取 1 ml 裂解液 FSL 至 2.0 ml 離心管內(nèi)，加入 10 %的 Boneaid，

（例如：1ml FSL 加 100 μl Boneaid），顛倒混勻后，65℃水浴中預(yù)熱。

多個樣本按比例放大。

③ 所有離心步驟均需要在室溫（15℃～25℃）下進(jìn)行。

1. 液氮研磨法：

a．用gu鉗夾碎骨組織，放入研缽（研缽在 180 度干烤 2 小時），在液氮中反復(fù)研磨成細(xì)粉。

注意：研磨時，要不斷補(bǔ)加液氮，保證樣本的研磨在液氮中進(jìn)行。

b．轉(zhuǎn)移 100 mg 細(xì)粉至 65℃預(yù)熱的裂解液 FSL（已加有 Boneaid）中，立即劇烈渦旋震蕩 30 Sec，充分混勻。

c． 下接步驟 3。

2. 其它骨組織破碎方法：

a． 取100mg骨組織加入1 ml預(yù)熱的裂解液FSL（已加有 Boneaid）， 高速均質(zhì)儀粉碎勻漿?；蛘呷?nbsp;100 mg 液氮冷凍包埋切片粉碎的骨頭加入 1 ml 裂解液 FSL（已加有 Boneaid）粉碎勻漿。

b． 下接步驟 3。

3. 短暫回放至 65℃水浴 10 min，中間偶爾顛倒 1～2 次，幫助裂解。

4. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

5. 轉(zhuǎn)移上清至一個新的 2.0 ml 離心管中，加入 0.5 倍上清體積的無水乙醇，吹打混勻。

6. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 過濾器中（過濾器放入收集管），13,000 rpm 離心 2 min，倒棄濾液。此時，絕大部分 gDNA 被濾除，RNA 和少量 gDNA 殘留被吸附在膜上，重復(fù)此過程，直到混合液全部轉(zhuǎn)入 gDNA 過濾器。

7. 取出步驟 6 的 gDNA 過濾器，放入一個新的 2.0 ml 離心管中，加入500 μl 裂解液 PRL Plus，13,000 rpm 離心 1 min，收集濾液（RNA 在濾液中），向?yàn)V液中加入 250μl 無水乙醇，吹打混勻。

8. 將濾液混合物加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 2 min，倒棄濾液。此時，RNA 被吸附在膜上。

9. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

10. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

11. 重復(fù)步驟 10 一次。

12. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙醇。

13. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

14. 提取的總RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，以免降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有 qPCR 儀)

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