H₂S 含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

H2S 含量測(cè)定試劑盒 信號(hào)系列

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

H2S 是一種新型氣態(tài)信號(hào)分子，存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)，生理濃度的H2S 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)海馬的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)功能具有重要的調(diào)節(jié)作用，并對(duì)自發(fā)性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過(guò)程發(fā)揮著重要的病理生理效應(yīng)。

測(cè)定原理：

H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對(duì)苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成ya甲基藍(lán)，ya甲基藍(lán)在 665nm 處有最大吸收峰，通過(guò)測(cè)定其吸光值可計(jì)算 H2S 含量。

組成：

試劑三：液體 16ml×1 瓶，4℃避光保存。試劑五：液體 2.5ml×1 瓶，4℃避光保存。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿、蒸餾水。

樣品處理:

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

血清（漿）：直接測(cè)定

操作表（取 2 ml 離心管，按照下表操作）:

H2S 計(jì)算公式:

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程為：y = 0.0044x，R2 = 0.9988

組織樣品

a.按照蛋白濃度計(jì)算

H2S（nmol/mg prot）= b.按照樣本重量計(jì)算 H2S（nmol/g 鮮重）=

ΔA ×V 反總÷（V 樣×Cpr）=340.9×ΔA÷Cpr

0.0044 

ΔA ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）= 340.9×ΔA÷W

液體樣品

H2S（nmol/ml）=

(3) 細(xì)胞

0.0044 

ΔA ×V 反總÷V 樣= 340.9×ΔA

0.0044

H2S（nmol/104 cell）=

ΔA ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))）=340.9×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

0.0044

V 反總：反應(yīng)總體積，0.9ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.6ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/ml

注意事項(xiàng):

最di檢出限為 1nmol/ml。

H2S 含量測(cè)定試劑盒 信號(hào)系列