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            北京諾博萊德科技有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第1年

            13269190901

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            輔酶ⅡNADP(H)含量試劑盒 輔酶Ⅰ系列

            參  考  價(jià)面議
            具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

            產(chǎn)品型號(hào)BF6002

            品       牌NobleRyder/諾博萊德

            廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

            所  在  地北京市

            更新時(shí)間:2025-04-04 17:45:45瀏覽次數(shù):128次

            聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 化工儀器網(wǎng)
            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T/48S
            貨號(hào) BF6002 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
            主要用途 是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一在PPP途徑生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用
            輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NADP+和NADPH 含量測(cè)定可以計(jì)算 NADP(NADPH + NADP+ )含量和 NADPH/NADP+比值,其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。
            輔酶ⅡNADP(H)含量試劑盒 輔酶Ⅰ系列


            輔酶ⅡNADP(H)含量試劑盒說(shuō)明書

            微量法 100 /48 

             

            正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)

            測(cè)定意義:

            輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NADP+NADPH 含量測(cè)定可以計(jì)算 NADP(NADPH + NADP+ )含量和 NADPH/NADP+比值,其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一,而且在 PPP 途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。

            測(cè)定原理:

            分別用酸性和堿性提取液提取樣品中 NADP+NADPH。NADPH 通過(guò)PMS 的遞氫作用,使氧化型噻唑藍(lán)(MTT)還原為甲瓚,570nm 下檢測(cè)吸光值,從而測(cè)定NADPH 含量。利用 6-磷酸葡萄糖脫氫酶還NADP+NADPH,從而檢測(cè)NADP+含量。

            輔酶ⅡNADP(H)含量試劑盒 輔酶Ⅰ系列

            組成:

            產(chǎn)品名稱

            BF6002-100T/48S

            Storage

            提取液:酸性提取液

            50ml

            4℃

            提取液:堿性提取液

            50ml

            4℃

            試劑一:液體

            10ml

            4℃

            試劑二:粉劑

            1

            -20℃

            試劑三:粉劑

            1

            -20℃

            試劑四:粉劑

            1

            4℃

            試劑五:液體

            3.6ml

            4℃

            試劑六:液體

            30ml

            4℃

            試劑七:液體

            50ml

            4℃

            說(shuō)明書

            一份

             

            試劑二:粉劑×1 支,-20 ℃保存,用時(shí)加入 3ml 蒸餾水,混勻;溶解后 4 保存一周;試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存,用時(shí)加入 3ml 蒸餾水,混勻;溶解后 4℃保存一周;試劑四:粉劑×1 支,4 ℃保存,用時(shí)加入 3ml 蒸餾水,混勻;溶解后 4℃保存一周;

            自備儀器和用品:

            酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

            NADP+ NADPH 的提?。?/span>

            1、 血清(漿) NADP+NADPH 的提取

            NADP+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml) 1:5~10 的比例(建議取約 0.1ml血清(漿),加入 1ml 酸性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μl 上清液,加入 500μl 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

            NADPH 的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml) 1:5~10 的比例(建議取約 0.1ml

            血清(漿),加入 1ml 堿性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 離心 10min;取 500μl 上清液,加入 500μl 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

            2、組織中NADP+NADPH 的提取

            NADP+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml) 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加1ml 酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μl 上清液,加入 500μl 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

            NADPH 的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml) 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1ml 堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μl 上清液,加入 500μl 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

            3、 細(xì)胞或細(xì)菌中 NADP+NADPH 的提取

            NADP+的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):酸性提取液體積(ml)500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μl 上清液,加入 500μl 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

            NADPH 的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):堿性提取液體積(ml)500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μl 上清液,加入 500μl 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

            測(cè)定步驟:

            1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 570nm,蒸餾水調(diào)零。

            2、加樣表( 1.5ml 棕色EP 管中按下表依次加樣):

            試劑名稱(μl)

            對(duì)照管

            測(cè)定管

            樣本

            20

            20

            試劑一

            80

            80

            試劑二

            30

            30

            試劑三

            30

            30

             


            試劑四

            30

            30


            試劑五

            30

            30

            試劑六

            200

            混勻,室溫避光靜置 20min

            試劑六


            200

            充分混勻,靜置 5min 后,20000g,25℃離心 5min,棄上清,沉淀中加入:

            試劑七

            400

            400

            混勻,取 200μl 轉(zhuǎn)移至微量石英比色皿或 96 孔板中,570nm 下讀取對(duì)照吸光值 A1 和測(cè)定管吸光值

            A2,計(jì)算△A=A2-A1。

             

            注意事項(xiàng)

            1、如果一次性測(cè)定樣本數(shù)較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。

            2、對(duì)照管和測(cè)定管的測(cè)定步驟的區(qū)別:對(duì)照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測(cè)定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應(yīng) 20min 后再加試劑六。

            3、反應(yīng)過(guò)程中注意避光。

            4、若NADP+測(cè)定中△A(A2-A1)≤0.0144,NADPH 測(cè)定中△A(A2-A1)≤0.0259,說(shuō)明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測(cè)限,可做如下調(diào)整:(1)將測(cè)定管避光靜置時(shí)間 20min 延長(zhǎng)到 60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取 0.2g 樣本或 0.2ml 樣本加入 1ml 提取液。

            5、由于每一個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管,本試劑盒 100 管保證測(cè) 48 個(gè)NADP+NADPH.

             

            NADP+ NADPH 含量的計(jì)算:

            (一)NADP+含量的計(jì)算

            標(biāo)準(zhǔn)條件下的回歸曲線為y = 0.0985x + 0.0144,R2 = 0.9998;其中y 為△A,x NADP+濃度nmol/ml 1、血清(漿) NADP+含量計(jì)算

            NADP+含量(nmol/ml)=[ (△A -0.0144)÷0.0985×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 203×(△A -0.0144)

            2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NADP+含量計(jì)算 (1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

            NADP+ (nmol/mg prot)=[(△A -0.0144)÷0.0985×V1) ]÷(V1×Cpr)= 10.2×(△A -0.0144)÷Cpr

            (2) 按樣本鮮重計(jì)算

            NADP+ (nmol/g 鮮重)= [(△A -0.0144)÷0.0985×V1)] ÷(W×V1÷V2)=20.3×(△A -0.0144)÷W

            (3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

            NADP+ (nmol/104 cell)=[(△A -0.0144)÷0.0985×V1)] ÷(500×V1÷V2)=0.04×(△A -0.0144)

             

            (二)NADPH 含量的計(jì)算

            標(biāo)準(zhǔn)條件下的回歸曲線為y = 0.6198x + 0.0259,R2 = 0.9977;其中y 為△A,x NADPH 濃度nmol/ml 1、血清(漿) NADPH 含量計(jì)算

            NADPH 含量(nmol/ml)= [(△A -0.0259)÷0.6198×V1)] ÷(V3×V1÷V2)= 32.3× (△A -0.0259)

            2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NADPH 含量計(jì)算

            (1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

            NADPH (nmol/mg prot)=[ (△A -0.0259)÷0.6198×V1)] ÷(V1×Cpr)= 1.6× (△A -0.0259)÷Cpr


            (2) 按樣本鮮重計(jì)算

            NADPH (nmol/g 鮮重)=[(△A -0.0259)÷0.6198×V1) ]÷(W×V1÷V2)=3.2× (△A -0.0259)÷W

            (3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

            NADPH (nmol/104 cell)=[(△A -0.0259)÷0.6198×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.006× (△A -0.0259)

             

            V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.02ml;V2:加入提取液體積,2ml;V3:加入血清(漿)體積:0.1ml; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml; W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬(wàn)。

            注意:zui低檢測(cè)限為 0.01nmol/ml  0.01nmol/g 鮮重 0.001nmol/mg prot


            輔酶ⅡNADP(H)含量試劑盒 輔酶Ⅰ系列


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