諾博萊德 Tissue/Cell RNA/DNA Mini Kit

動(dòng)物組織/細(xì)胞 RNA/ DNA 共提試劑盒（免lv仿）

動(dòng)物組織細(xì)胞RNA/DNA共提試劑盒

目錄號：91219

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙chun

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

Tissue/Cell RNA/DNA Mini Kit（免lv仿）適用于從各種動(dòng)物組織、細(xì)胞中同時(shí)提取出總 RNA 和基因組 DNA，提取全程不需要使用lv仿，得到包含總 RNA，不需要DNase I消化，可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、測序等?；蚪M DNA 也可以直接用于下游的 Southern、mei切、PCR 等各種試驗(yàn)。

du特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞 RNase/DNase，然后裂解混合物RNA/DNA同時(shí)通過一個(gè)gDNA吸附柱，基因組DNA被吸附而RNA穿透濾過。gDNA 吸附柱上的基因組DNA經(jīng)過一系列漂洗、洗脫后得到純凈基因組DNA。濾過的總RNA，先用乙chun調(diào)節(jié)結(jié)合條件，然后轉(zhuǎn)入RNA吸附柱，在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于RNA吸附柱上，接著通過一系列快速的離心-漂洗-離心-洗脫，得到純凈的總RNA。

注意事項(xiàng)

1. 采集 RNA 樣本時(shí)，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液，91115-100) 中，可在37℃保存一天，在25℃保存一周，在 4℃保存一個(gè)月，在-20℃或者–80℃長期保存。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量。

3. 提取時(shí)，RNA 在裂解液 MRL Plus 中時(shí)不會(huì)被 RNase 降解，但后續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的吸頭和器皿。

4. 樣品在加入裂解液 MRL Plus 并勻漿后，可在–80℃保存一個(gè)月以上。

5. 所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時(shí)溶液可能形成沉淀，此時(shí)不應(yīng)該直接使用，可在 37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。

重要提示：

① 第一次使用前, 請先在漂洗液 RW 、70%乙chun、漂洗液 WB 瓶中加入

zhi定量無水乙chun，詳見瓶上的標(biāo)簽。

② 所有離心步驟均需要在室溫（15~25℃）下進(jìn)行，提取效果更佳！

操作步驟

1. 動(dòng)物組織：

a．電動(dòng)勻漿：取新鮮組織10~20 mg加入 500μl裂解液MRL Plus，電動(dòng)勻漿，直到無明顯組織塊即可。

b．液氮研磨：液氮研磨組織成細(xì)粉，取10~20 mg組織細(xì)粉加入500μl 裂解液 MRL Plus，劇烈渦旋振蕩，直到無明顯粉末團(tuán)即可。

c． 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。

d．下接操作步驟 3。

2. 細(xì)胞

a. 懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，加入500μl裂解液 MRL Plus（<8x10⁶細(xì)胞）, 吹打混勻，劇烈渦旋振蕩20sec，充分裂解。

b. 貼壁細(xì)胞：不需要消化，吸棄培養(yǎng)基后，直接在培養(yǎng)皿/板中加裂解液MRL Plus（每<8x10⁶細(xì)胞加500μl裂解液MRL Plus）進(jìn)行消化、裂解；或者，先用胰mei消化后離心收集細(xì)胞，然后加入裂解液MRL Plus，吹打混勻，劇烈渦旋振蕩20sec，充分裂解。

c. 下接操作步驟 3。

3. 將裂解勻漿物（或離心得到的上清）全部加入gDNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm離心1min，基因組DNA被吸附在膜上，保留濾液（RNA 在濾液中）。把 gDNA 吸附柱放入2.0 ml離心管，置于4℃度，以備提取DNA用。

以下是總RNA的提取步驟：

4. 向?yàn)V液中加入等體積的70%乙chun，用移液器吹打混勻。

5. 每次轉(zhuǎn)移≤750μl濾液混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm離心1min，此時(shí)，RNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。

6. 加入700μl去蛋白液RW1，室溫放置1min,13,000rpm離心30sec，倒棄濾液。

7. 加入500μl漂洗液RW（檢查是否已加入乙chun），13,000 rpm離30sec，倒棄濾液。

8. 重復(fù)步驟 7。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心2min，除去膜上殘留的乙chun。

10. 取出RNA吸附柱，放入RNase-free 1.5 ml離心管中，向RNA吸附膜的中央部位懸空滴加30~50μl 的RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心1min，管底即總 RNA。

11. 得到RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，以免降解。

以下是 DNA 的提取步驟：

12. 向步驟3的gDNA吸附柱中，加入500μl抑制物去除液IR，12,000 rpm離心30sec，倒棄濾液。

13. 加入700μl漂洗液WB（檢查是否已加入乙chun），12,000 rpm離心30sec，倒棄濾液。

14. 加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30sec，倒棄濾液。

15. 將 DNA 吸附柱放回空收集管中，13,000rpm 離心2 min，甩干吸附膜上殘留的乙chun。

16. 取出 gDNA 吸附柱，放入新的 1.5 ml 的離心管中，向吸附膜的中央懸空滴加100μl 洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65~70℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置 3~5 min，12,000rpm離心1 min。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2min，12,000 rpm離心1 min。

17. 得到的DNA可以存放在2~8℃，如果要長時(shí)間存放，可以放置在- 20℃。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

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