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 ---ETD技術(shù)發(fā)明人做技術(shù)報(bào)告

         2013年2月17日，第十屆烏普薩拉電子捕獲與電子轉(zhuǎn)移裂解會(huì)議（UPPCON 2013）在北京友誼賓館召開(kāi)，由北京生命科學(xué)研究所（NIBS）和中科院計(jì)算技術(shù)研究所合作承辦。UPPCON 2013是一個(gè)偏重質(zhì)譜基礎(chǔ)研究的會(huì)議，圍繞離子-離子和離子-電子的氣相反應(yīng)的理論、實(shí)驗(yàn)、儀器開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，數(shù)位zui的資深的學(xué)者介紹他們的研究工作。

　　賽默飛科技ETD技術(shù)發(fā)明人John E.P. Saka博士的報(bào)告題目是《Instrumental Approaches to Improving ETD Spectral Quality》，介紹了ETD技術(shù)的zui近進(jìn)展。ETD是基于離子/離子氣相化學(xué)一種碎裂多肽的新方法，是鑒定蛋白及其翻譯后修飾強(qiáng)有力的工具。ETD通過(guò)從陰離子自由基到質(zhì)子肽轉(zhuǎn)移電子的化學(xué)能量將肽碎裂，引發(fā)多肽骨干分裂，獲得蛋白質(zhì)翻譯后修飾的重要序列信息。

　　傳統(tǒng)的誘導(dǎo)活化裂解（CAD）常用來(lái)鑒定蛋白，并試圖確定和找到它們修飾的位點(diǎn)，但CAD技術(shù)有其固有的缺點(diǎn)。與線(xiàn)性離子阱的結(jié)合使用的ETD，可以很容易鑒定用CAD不能鑒定的多肽。
ETD 是由電子捕獲解離ECD 發(fā)展而來(lái)，但ECD 僅能在的FT ICR 高分辨質(zhì)譜上使用，而ETD 的誕生，可以較為經(jīng)濟(jì)的在低分辨離子阱質(zhì)譜上實(shí)現(xiàn)同樣的功能。報(bào)告討論了在質(zhì)譜上提高ETD產(chǎn)生離子的數(shù)量的方法。分別從兩個(gè)方面，一是zui大化進(jìn)入ETD的離子數(shù)量，一是zui大化ETD產(chǎn)生的m/z離子的數(shù)量。

        賽默飛Demo實(shí)驗(yàn)室張偉博士做了題為《Method Development of Typical ETD Experiments for Proteomics Applications》的報(bào)告。
張博士認(rèn)為，ETD的發(fā)展非常迅速，能獲得更豐富的系列碎片。在蛋白質(zhì)組學(xué)等領(lǐng)域，ETD與CID是很好的互補(bǔ)，30%蛋白質(zhì)組學(xué)的用戶(hù)都在使用這個(gè)技術(shù)。

　　ETD產(chǎn)生離子的反應(yīng)機(jī)理
       ETD產(chǎn)生離子的反應(yīng)機(jī)理很簡(jiǎn)單，當(dāng)電子轟擊氮?dú)獾臅r(shí)候，會(huì)產(chǎn)生一個(gè)熱電子，熱電子很容易被捕獲，肽段發(fā)生斷裂反應(yīng)。相對(duì)于傳統(tǒng)的CAD技術(shù)， ETD提供了更穩(wěn)定的方法來(lái)定性PTMs，鑒定大型多肽或甚至整個(gè)蛋白質(zhì)。ETD能夠?qū)⑵胀ǚg后修飾的多肽，或者多個(gè)堿性殘基的多肽甚至整個(gè)蛋白質(zhì)生成離子。 ETD也可以輕易碎裂含有二硫鍵的的多肽。

　　ETD達(dá)到*狀態(tài)的途徑
　　ETD實(shí)驗(yàn)達(dá)到的狀態(tài)，主要通過(guò)四個(gè)部分的調(diào)節(jié)，一是對(duì)ETD源的調(diào)諧和優(yōu)化，二是建立合適的Tune文件，三是建立分析方法，zui后是數(shù)據(jù)處理、搜庫(kù)軟件。
ETD應(yīng)用的例子
CID+ETD、CID-NL-ETD、DDDT的磷酸化蛋白質(zhì)組的分析。從老鼠睪丸體中取出全蛋白，通過(guò)胰蛋白酶分解后，用IMAC富集，然后數(shù)據(jù)處理就用PD Workflow。通過(guò)一系列的數(shù)據(jù)處理之后就得到所有譜圖的鑒定結(jié)果。CID+ETD、CID-NL-ETD、DDDT三種策略也是很好的互補(bǔ)。