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氣相色譜法測(cè)定法莫替丁中有機(jī)溶劑殘留量
閱讀：1917 發(fā)布時(shí)間：2012-8-6
摘要:目的：建立法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇?xì)埩袅康臏y(cè)定方法。方法采用毛細(xì)管氣相色譜法,色譜柱為HP-Wax;柱溫:50℃保持3min,以20℃/min升溫至120℃保持4min;載氣為氮?dú)?檢測(cè)器為FID;外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果：在該色譜條件下,測(cè)得各溶劑線性均良好（r=0.9996～0.9997）;平均回收率分別為97.86%,98.16%和98.04%,RSD分別為1.34%,1.21%和0.94%;甲醇、丙酮和乙醇的zui低檢測(cè)限分別為0.004%、0.002%和0.004%;3批樣品中上述有機(jī)溶劑殘留量均符合要求。結(jié)論：該毛細(xì)管氣相色譜法靈敏、準(zhǔn)確、可靠,適用于本品中有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定。
關(guān)鍵詞:法莫替丁;毛細(xì)管氣相色譜法;有機(jī)溶劑殘留量
藥物中的殘留溶劑是指在原料藥或賦型劑的生產(chǎn)中,以及在制劑制備過(guò)程中產(chǎn)生或使用的有機(jī)揮發(fā)性化合物。由于殘留溶劑不僅沒(méi)有療效,還可能增加藥物的毒副作用,而且影響藥物的穩(wěn)定性,故所有的有機(jī)溶劑應(yīng)盡可能除去。為了保護(hù)患者免受藥物中殘留有機(jī)溶劑的傷害,需對(duì)藥品在生產(chǎn)過(guò)程中引入的有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行測(cè)定。法莫替丁為組胺H2受體阻滯藥,對(duì)胃酸分泌具有明顯的抑制作用,適用于消化性潰瘍（胃、十二指腸潰瘍）、急性胃黏膜病變、反流性食管炎以及胃泌素瘤。由于合成本品過(guò)程中使用甲醇等有機(jī)溶劑,故有可能會(huì)殘留在產(chǎn)品中,本文參考中國(guó)藥典2000年版二部法莫替丁項(xiàng)下方法,建立了氣相色譜法,以毛細(xì)管柱代替填充柱,同時(shí)測(cè)定法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇?xì)埩袅?結(jié)果表明本法分離度高、靈敏、準(zhǔn)確且簡(jiǎn)便。
1實(shí)驗(yàn)部分
1.1儀器與試藥
普瑞GC-7800氣相色譜儀,甲醇、丙酮、乙醇及二甲基甲酰胺（DMF）均為分析純?cè)噭７娑∽灾茦悠罚ㄅ?hào)200302001、200302002、200302003）,法莫替丁市售品（鄭州瑞泰制藥有限公司,批號(hào)20030203）。
1.2色譜條件
色譜柱:（鍵合聚乙二醇,30m×0.32mm×0.50μm）;柱溫:50℃保持3min,以20℃/min升溫至120℃保持4min;檢測(cè)室溫度:200℃;進(jìn)樣溫度:200℃;載氣:氮?dú)?柱頭壓:68.95kPa;FDI檢測(cè)器;頂空進(jìn)樣0.5mL。
1.3溶液配制
對(duì)照溶液:稱取299.8mg甲醇、500.2mg丙酮、499.6mg乙醇于100mL容量瓶中,加DMF稀釋至刻度,為對(duì)照貯備溶液,每1mL含2.998mg甲醇、5.002mg丙酮、4.996mg乙醇。依次取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL對(duì)照貯備溶液
分別至10mL容量瓶中,加DMF稀釋至刻度,制得系列濃度的對(duì)照溶液,每1mL含甲醇60.0、120、180、240、300μg;丙酮100、200、300、400、500μg;乙醇100、200、300、400、500μg。
供試品溶液:稱取2g供試品于20mL容量瓶中,加DMF溶解并稀釋至刻度。測(cè)定:精密量取對(duì)照溶液和供試品溶液各10mL,分別置于25mL頂空瓶中,在80℃的恒溫箱中加熱30min,取頂空氣0.5mL進(jìn)樣。
2結(jié)果與討論
2.1專屬性試驗(yàn)
取甲醇、丙酮和乙醇依次進(jìn)樣,記錄保留時(shí)間作為定性指標(biāo)。色譜圖中各成分峰的保留時(shí)間分別為2.577min、1.913mim和3.048min,各成分峰之間峰分離度良好。
2.2線性范圍
取系列濃度的對(duì)照溶液（每1mL含甲醇60.0、120、180、240、300μg;丙酮100、200、300、400、500μg;乙醇100、200、300、400、500μg）依次進(jìn)樣,記錄峰面積。將峰面積對(duì)濃度進(jìn)行回歸,得回歸方程。
2.3回收率試驗(yàn)
精密稱定法莫替丁樣品（批號(hào)200302001）約0.5g,精密加入中濃度對(duì)照品溶液10mL,混勻,進(jìn)樣0.5mL,計(jì)算甲醇、丙酮和乙醇的平均回收率（n=3）分別為97.86%,98.16%和98.04%,RSD分別為1.34%,1.21%和0.94%,表明方法準(zhǔn)確可靠。
2.4精密度試驗(yàn)
取中濃度的對(duì)照溶液（每1mL含甲醇180μg、丙酮300μg和乙醇300μg）連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄色譜圖,甲醇、丙酮和乙醇峰面積的RSD分別為1.91%、1.34%和0.93%（n=6）,表明精密度良好。
2.5zui低檢測(cè)限
以信噪比3∶1（S/N=3）計(jì)算,甲醇、丙酮和乙醇的zui低檢測(cè)限分別為0.004%、0.002%和0.004%,根據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求協(xié)調(diào)會(huì)（簡(jiǎn)稱ICH）對(duì)藥品中限制使用溶劑殘留*規(guī)定為甲醇≤0.3%,丙酮和乙醇≤0.5%,表明本方法的檢測(cè)靈敏度符合要求。
2.6樣品測(cè)定結(jié)果
取自制樣品3批（批號(hào)200302001、200302002、200302003）及上市品1批,依法測(cè)定,用標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算甲醇、丙酮和乙醇的殘留量,結(jié)果表明,3批自制樣品及1批上市品中甲醇、丙酮和乙醇3種有機(jī)溶劑的殘留量均符合ICH規(guī)定;自制樣品所采用的合成工藝和技術(shù)路線與上市品有所不同,因此3種有機(jī)溶劑的殘留量也不同,自制樣品采用乙醇作為精制溶劑,故只檢出乙醇;上市品則未檢出乙醇,而甲醇和丙酮有一定的殘留。
3討論與小結(jié)
在中國(guó)藥典2000年版二部,法莫替丁中甲醇的GC檢查方法采用填充柱,本法采用毛細(xì)管柱法,由于毛細(xì)管柱法的分離度好,且頂空進(jìn)樣與溶液法直接進(jìn)樣相比具有靈敏度高、干擾小的優(yōu)點(diǎn),因此用于同時(shí)測(cè)定藥物中的甲醇、丙酮、乙醇?xì)埩袅?效果令人滿意。DMF由于溶解性好,對(duì)藥物和甲醇、丙酮、乙醇均有較好的溶解能力,因此,本法選用DMF作溶劑。所建立的甲醇、丙酮和乙醇?xì)埩袅康腉C檢查方法,經(jīng)方法學(xué)檢驗(yàn)是準(zhǔn)確可靠的,可用于法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇?xì)埩袅康臋z查
關(guān)鍵詞:法莫替丁;毛細(xì)管氣相色譜法;有機(jī)溶劑殘留量
藥物中的殘留溶劑是指在原料藥或賦型劑的生產(chǎn)中,以及在制劑制備過(guò)程中產(chǎn)生或使用的有機(jī)揮發(fā)性化合物。由于殘留溶劑不僅沒(méi)有療效,還可能增加藥物的毒副作用,而且影響藥物的穩(wěn)定性,故所有的有機(jī)溶劑應(yīng)盡可能除去。為了保護(hù)患者免受藥物中殘留有機(jī)溶劑的傷害,需對(duì)藥品在生產(chǎn)過(guò)程中引入的有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行測(cè)定。法莫替丁為組胺H2受體阻滯藥,對(duì)胃酸分泌具有明顯的抑制作用,適用于消化性潰瘍（胃、十二指腸潰瘍）、急性胃黏膜病變、反流性食管炎以及胃泌素瘤。由于合成本品過(guò)程中使用甲醇等有機(jī)溶劑,故有可能會(huì)殘留在產(chǎn)品中,本文參考中國(guó)藥典2000年版二部法莫替丁項(xiàng)下方法,建立了氣相色譜法,以毛細(xì)管柱代替填充柱,同時(shí)測(cè)定法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇?xì)埩袅?結(jié)果表明本法分離度高、靈敏、準(zhǔn)確且簡(jiǎn)便。
1實(shí)驗(yàn)部分
1.1儀器與試藥
普瑞GC-7800氣相色譜儀,甲醇、丙酮、乙醇及二甲基甲酰胺（DMF）均為分析純?cè)噭７娑∽灾茦悠罚ㄅ?hào)200302001、200302002、200302003）,法莫替丁市售品（鄭州瑞泰制藥有限公司,批號(hào)20030203）。
1.2色譜條件
色譜柱:（鍵合聚乙二醇,30m×0.32mm×0.50μm）;柱溫:50℃保持3min,以20℃/min升溫至120℃保持4min;檢測(cè)室溫度:200℃;進(jìn)樣溫度:200℃;載氣:氮?dú)?柱頭壓:68.95kPa;FDI檢測(cè)器;頂空進(jìn)樣0.5mL。
1.3溶液配制
對(duì)照溶液:稱取299.8mg甲醇、500.2mg丙酮、499.6mg乙醇于100mL容量瓶中,加DMF稀釋至刻度,為對(duì)照貯備溶液,每1mL含2.998mg甲醇、5.002mg丙酮、4.996mg乙醇。依次取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL對(duì)照貯備溶液
分別至10mL容量瓶中,加DMF稀釋至刻度,制得系列濃度的對(duì)照溶液,每1mL含甲醇60.0、120、180、240、300μg;丙酮100、200、300、400、500μg;乙醇100、200、300、400、500μg。
供試品溶液:稱取2g供試品于20mL容量瓶中,加DMF溶解并稀釋至刻度。測(cè)定:精密量取對(duì)照溶液和供試品溶液各10mL,分別置于25mL頂空瓶中,在80℃的恒溫箱中加熱30min,取頂空氣0.5mL進(jìn)樣。
2結(jié)果與討論
2.1專屬性試驗(yàn)
取甲醇、丙酮和乙醇依次進(jìn)樣,記錄保留時(shí)間作為定性指標(biāo)。色譜圖中各成分峰的保留時(shí)間分別為2.577min、1.913mim和3.048min,各成分峰之間峰分離度良好。
2.2線性范圍
取系列濃度的對(duì)照溶液（每1mL含甲醇60.0、120、180、240、300μg;丙酮100、200、300、400、500μg;乙醇100、200、300、400、500μg）依次進(jìn)樣,記錄峰面積。將峰面積對(duì)濃度進(jìn)行回歸,得回歸方程。
2.3回收率試驗(yàn)
精密稱定法莫替丁樣品（批號(hào)200302001）約0.5g,精密加入中濃度對(duì)照品溶液10mL,混勻,進(jìn)樣0.5mL,計(jì)算甲醇、丙酮和乙醇的平均回收率（n=3）分別為97.86%,98.16%和98.04%,RSD分別為1.34%,1.21%和0.94%,表明方法準(zhǔn)確可靠。
2.4精密度試驗(yàn)
取中濃度的對(duì)照溶液（每1mL含甲醇180μg、丙酮300μg和乙醇300μg）連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄色譜圖,甲醇、丙酮和乙醇峰面積的RSD分別為1.91%、1.34%和0.93%（n=6）,表明精密度良好。
2.5zui低檢測(cè)限
以信噪比3∶1（S/N=3）計(jì)算,甲醇、丙酮和乙醇的zui低檢測(cè)限分別為0.004%、0.002%和0.004%,根據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求協(xié)調(diào)會(huì)（簡(jiǎn)稱ICH）對(duì)藥品中限制使用溶劑殘留*規(guī)定為甲醇≤0.3%,丙酮和乙醇≤0.5%,表明本方法的檢測(cè)靈敏度符合要求。
2.6樣品測(cè)定結(jié)果
取自制樣品3批（批號(hào)200302001、200302002、200302003）及上市品1批,依法測(cè)定,用標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算甲醇、丙酮和乙醇的殘留量,結(jié)果表明,3批自制樣品及1批上市品中甲醇、丙酮和乙醇3種有機(jī)溶劑的殘留量均符合ICH規(guī)定;自制樣品所采用的合成工藝和技術(shù)路線與上市品有所不同,因此3種有機(jī)溶劑的殘留量也不同,自制樣品采用乙醇作為精制溶劑,故只檢出乙醇;上市品則未檢出乙醇,而甲醇和丙酮有一定的殘留。
3討論與小結(jié)
在中國(guó)藥典2000年版二部,法莫替丁中甲醇的GC檢查方法采用填充柱,本法采用毛細(xì)管柱法,由于毛細(xì)管柱法的分離度好,且頂空進(jìn)樣與溶液法直接進(jìn)樣相比具有靈敏度高、干擾小的優(yōu)點(diǎn),因此用于同時(shí)測(cè)定藥物中的甲醇、丙酮、乙醇?xì)埩袅?效果令人滿意。DMF由于溶解性好,對(duì)藥物和甲醇、丙酮、乙醇均有較好的溶解能力,因此,本法選用DMF作溶劑。所建立的甲醇、丙酮和乙醇?xì)埩袅康腉C檢查方法,經(jīng)方法學(xué)檢驗(yàn)是準(zhǔn)確可靠的,可用于法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇?xì)埩袅康臋z查