氨基酸分析儀檢測透明膠質(zhì)類中的蛋白水氨基酸

時間：2023-9-27 閱讀：1122

摘要：

本品為未知含量及種類的氨基酸配制而成的透明膠質(zhì)類物質(zhì)，使用Biochrom30+全自動氨基酸分析儀，對其所含的游離氨基酸組分及含量進行分析。結(jié)果表明該未知樣中氨基酸各單個氨基酸含量的濃度見附頁結(jié)果表。其中樣AE01氨基酸總含量為31.969 umol/mL，AE03氨基酸總含量為36.790 umol/mL。

一、樣品前處理

1、所用試劑

1.1 Loading Buffer：鈉鹽系統(tǒng)，pH 2.2

1.2 濃鹽酸，濃度≥36%,優(yōu)級純

1.3 6mol/L 鹽酸：取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻

1.4 水：去離子水

1.5 17種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

2、前處理設(shè)備

1) 分析天平:精度為 0.0001g

2) 移液槍及槍頭

3) 一次性注射器及0.22um濾膜

4) 低范圍pH試紙

5) 真空干燥烘箱

6) 無油真空泵

7) 電熱平板及稱量瓶

3、樣品制備（參考shipinzhongAAS的測定）

移液槍準(zhǔn)確移取試樣1mL，加入水解管中，加入10mL 6mol/L鹽酸(1.3)，冷凍3min?5min,接到真空泵的抽氣管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮氣,重復(fù)抽真空-充入氮氣步驟3次后,在充氮氣狀態(tài)下擰緊螺蓋。將水解管放入真空干燥箱中，110°C水解22-24h，冷卻、混勻、開管、轉(zhuǎn)移并定容到50ml容量瓶中，用移液槍取適量水解液于稱量瓶中，在電熱平板上60℃濃縮至干，必要時加入少許水(1.4)，重復(fù)蒸干1-2次，加入適量PH2.2的稀釋上機用檸檬酸鈉緩沖液溶解(1.1),振蕩混勻后,吸取溶液通過0.22 μm 濾膜后,轉(zhuǎn)移至進樣瓶,為樣品測定液,供儀器測定用。

二、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：

1) 色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6′20cm

2) 分離程序：

運行時間：經(jīng)分析時間+再生時間 59.35min

3) 反應(yīng)單元溫度：135°C

4) 檢測波長：570nm、440nm同時檢測

三、樣品中氨基酸含量的計算

樣品測定液氨基酸的含量按式(1)計算：

Ci = Cs/As × Ai× F ··········(1)式中:

Ci ——樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

Cs ——氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

Ai ——試樣測定液氨基酸i的峰面積;

As ——氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的峰面積;

F ——樣品稀釋倍數(shù)。

附、透明膠質(zhì)類中的蛋白水解氨基酸其分析圖譜及做樣結(jié)果：

圖1. 樣品AE01

圖2. 樣品AE03

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