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            小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養(yǎng)方法

            來源:鏡像綺點(上海)細胞技術有限公司   2019年12月27日 17:47  

            平滑肌即無紋肌的通稱,平滑肌是由長紡錘形的單核細胞構成。它不構成獨立的器官,而只是成為構成體壁和內臟壁的因素(肌層)。平滑肌細胞互相連接,形成管狀結構或中空器官;在功能上可以通過縮短和產生張力使器官發(fā)生運動和變形,也可產生連續(xù)收縮或緊張性收縮,使器官對抗所加負荷而保持原有的形狀。

            小鼠支氣管平滑肌細胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關.如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發(fā)病時,可以檢測到氣管平滑肌發(fā)生數(shù)目的增生和肥大,表型也發(fā)生改變,由收縮型轉為合成型與分泌型,并分泌多種與細胞因子;而且出現(xiàn)向氣管腔遷移的跡象。

             

            小鼠支氣管平滑肌細胞來源于實驗動物正常支氣管組織長梭狀細胞,貼壁培養(yǎng)。通過平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色鑒定為陽性鑒定純度高于90%,不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

            1.試驗所需儀器設備及試劑

            (1)儀器

            儀器名稱

            規(guī)格型號

            廠家

            生物安全柜

            BSC-1500ⅡA2-X

            濟南鑫貝西生物技術有限公司

            CO2細胞培養(yǎng)箱

            BC-J160S

            上海博迅實業(yè)有限公司

            熒光倒置顯微鏡

            DS-Ri2

            Nikon

            高速冷凍離心機

            Multifuge X1R

            Thermo Fisher

            電熱恒溫鼓風干燥箱

            DHG-9123A

            上海精宏實驗設備有限公司

            (2)試劑耗材

            試劑名稱

            規(guī)格/貨號

            廠家

            T25細胞培養(yǎng)瓶

            430639

            Coming

            血球計數(shù)板

            Neubauer improved

            Marienfeld

            細胞培養(yǎng)孔板

            WHB-24

            上海臥宏生物科技有限公司

            平滑肌細胞*培養(yǎng)基

            PriMed-iCell-004

            鏡像綺點(上海)細胞技術有限公司

            0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA)

            1734858

            Gibico

             

            2.小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養(yǎng)

            1) 取4-5周齡的小鼠,斷頸處死后,泡于75%的酒精中,

            2) 剖開胸腔,取出完整氣管及肺組織,放入無菌PBS中,

            3) 在體視顯微鏡下,小心分離出下游支氣管,

            4) 用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎,

            5) 加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃過夜消化,

            6) 第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h,

            7) 待液體變渾濁后加入*培養(yǎng)基終止消化,充分吹打,

            8) 過100目篩網,收集濾液,1000rpm離心5min,棄去上清,

            9) 用*培養(yǎng)基重懸沉淀,鋪瓶。

            除了上述的細胞分離方法以外,鏡像綺點還有很多關于其他細胞的分離方法,想要學習的小伙伴可以來鏡像綺點進行現(xiàn)場學習,如果想要其他原代分離培養(yǎng)方法,可在購買相應的細胞過程中,贈送該細胞的分離方法及培養(yǎng)條件,想要了解更多,打電話或咨詢相關工作人員。

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