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            產(chǎn)品推薦：氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱
            	
            
		
            
			
			
			
            
				2024版儀器采購(gòu)寶典電子書				
            
			
            
		
            
	
            
		
            
		
            
			
            化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>選購(gòu)指南>正文
            
		
            
	
            
	
            
		
            
			
			
            
				
            
					
            
						
            
						
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            產(chǎn)品推薦 | 細(xì)胞轉(zhuǎn)染老兵：磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑！
            
							
            
								來(lái)源：翌圣生物科技（上海）股份有限公司  
								2024年10月15日 09:07  
                                
    
    
    
        
							
            
						
            
						
            
							
            磷酸鈣轉(zhuǎn)染試劑是一種經(jīng)典的基因轉(zhuǎn)染工具，它通過(guò)形成DNA-磷酸鈣共沉淀物，促進(jìn)細(xì)胞通過(guò)內(nèi)吞作用吸收DNA，適用于多種真核細(xì)胞的瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，以其操作簡(jiǎn)便、成本低廉、轉(zhuǎn)染效率高而廣受歡迎。

             
             
            基本原理
            01
             
             
            01
            DNA與磷酸鈣的結(jié)合
            在含有磷酸鹽的緩沖液（HBS）中，加入氯化鈣（CaCl2）溶液和含有目的DNA的溶液。
            DNA分子在生理pH條件下帶負(fù)電荷，而磷酸鈣帶正電荷，通過(guò)靜電作用，DNA與磷酸鈣結(jié)合。
            02
            形成DNA-磷酸鈣共沉淀物
            當(dāng)DNA與磷酸鈣混合后，會(huì)形成DNA-磷酸鈣共沉淀物。這些沉淀物是微小的DNA-磷酸鈣復(fù)合體，它們可以吸附到細(xì)胞表面。
            03
            細(xì)胞吸收共沉淀物
            將形成的DNA-磷酸鈣共沉淀物添加到待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)基中。細(xì)胞通過(guò)內(nèi)吞作用吸收這些共沉淀物。
            04
            DNA進(jìn)入細(xì)胞
            內(nèi)吞后的DNA-磷酸鈣復(fù)合體被包裹在內(nèi)吞體內(nèi)，隨后內(nèi)吞體與溶酶體融合，DNA被釋放到細(xì)胞質(zhì)中。
            05
            DNA的表達(dá)
            釋放到細(xì)胞質(zhì)中的DNA可以通過(guò)細(xì)胞的核孔復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞核，進(jìn)行蛋白表達(dá)。
             
            翌圣生物的磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，基于傳統(tǒng)方法優(yōu)化，提高轉(zhuǎn)染效率，減少細(xì)胞毒性，特別適合HEK293、293T和Hela等細(xì)胞系。適用于瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，即開即用，操作簡(jiǎn)便。
             
            產(chǎn)品特點(diǎn)
            02
            • 性能穩(wěn)定：可在2-8℃保存，有效期2年；
            • 轉(zhuǎn)染效率高：在293T細(xì)胞上陽(yáng)性率高達(dá)95%；
            • 毒性低：對(duì)細(xì)胞基本無(wú)毒，轉(zhuǎn)染后不影響細(xì)胞正常生長(zhǎng)。
             
             
            結(jié)果展示
            03
            6孔板中，使用翌圣磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑在293T細(xì)胞上轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒， 按照轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作；轉(zhuǎn)染48 h后，熒光倒置顯微鏡下觀察并拍照。結(jié)果顯示，翌圣磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑在293T細(xì)胞上的轉(zhuǎn)染效率高達(dá)95%以上。
             
            293T細(xì)胞（6孔板）
             
             
            操作方法
            04
             
            01
             
            按照60％左右的密度種植細(xì)胞入培養(yǎng)皿（瓶），細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)12-24小時(shí)后即可準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染；
            02
             
            準(zhǔn)備1.5 mL離心管，按照下表指示，依次加入DNA、HBS和CaCl2；
            03
             
            振蕩混勻后室溫靜置15分鐘；
            04
             
            吹打3－5 次后均勻加到待轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)液中，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿（瓶）；
            05
             
            放置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；
            06
             
            轉(zhuǎn)染6小時(shí)后換液；
            07
             
            24-48小時(shí)檢測(cè)目的蛋白質(zhì)的表達(dá)。
             
            不同培養(yǎng)容器試劑使用量（僅供參考）
            細(xì)胞培養(yǎng)試劑
            6孔板
            T-25培養(yǎng)瓶
            10 cm平皿
            培養(yǎng)基（mL）
            2
            5
            10
            DNA（μg）
            2
            4
            7.5
            HBS（mL）
            0.2
            0.5
            1
            CaCl2（μL）
            14
            35
            70
             
             
            產(chǎn)品信息
            05
            產(chǎn)品名稱
            產(chǎn)品規(guī)格
            產(chǎn)品貨號(hào)
            Hieff Trans®Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
            200T
            40803ES70
             
             
            相關(guān)產(chǎn)品
            06
            產(chǎn)品名稱
            產(chǎn)品規(guī)格
            產(chǎn)品貨號(hào)
            Hieff Trans® Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑
            100 μL/1 mL
            40802ES01/40802ES03
            Hieff Trans®Polybrene(hexadimethrine bromide) 聚凝胺(10 mg/mL)
            500 μL/5×500 μL
            40804ES76/40804ES86
            Hieff Trans® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑
            100 μL/1 mL
            40805ES01/40805ES03
            Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑
            100μL/1mL
            40806ES01/40806ES03
            Hieff Trans® Universal Transfection Reagent通用型轉(zhuǎn)染試劑
            0.5 mL /1 mL
            40808ES02/40808ES03
            Hieff Trans® mRNA Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑
            100μL/1mL
            40809ES01/40809ES03
            Hieff Trans® PEI Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑
            1.5 mL /10 mL /100 mL
            40820ES04/40820ES10
            /40820ES60
            Hieff Trans® PEI Transfection Reagent-GMP轉(zhuǎn)染試劑
            10 mL /100 mL/1L
            40821ES10/40821ES60
            /40821ES80
            Hieff Trans® Ultra PEI-AAV Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑
            1 mL /10 mL /100mL
            40823ES03/40823ES10
            /40823ES60
             


            
						
            
					
            
										
										
            
						
						  
            
							
            免責(zé)聲明
            
						  
            
						  
              
							
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