1952年,Nomarski在相差顯微鏡原理的基礎上發(fā)明了微分干涉差顯微鏡(differential interference contrast microscope),簡稱:DIC。
DIC顯微鏡又稱Nomarski相差顯微鏡(Nomarki contrast microscope),其優(yōu)點是能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影影像。與相差顯微鏡相比,其標本可略厚一點,折射率差別更大,故影像的立體感更強。
DIC顯微鏡的物理原理*不同于相差顯微鏡,技術設計要復雜得多。DIC利用的是偏振光,有四個特殊的光學組件:偏振器(polarizer)、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器(analyzer)。偏振器直接裝在聚光系統(tǒng)的前面,使光線發(fā)生線性偏振。在聚光器中則安裝了石英Wollaston棱鏡,即DIC棱鏡,此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光(x和y),二者成一小夾角。聚光器將兩束光調(diào)整成與顯微鏡光軸平行的方向。zui初兩束光相位一致,在穿過標本相鄰的區(qū)域后,由于標本的厚度和折射率不同,引起了兩束光發(fā)生了光程差。在物鏡的后焦面處安裝了第二個Wollaston棱鏡,即DIC滑行器,它把兩束光波合并成一束。這時兩束光的偏振面(x和y)仍然存在。zui后光束穿過第二個偏振裝置,即檢偏器。在光束形成目鏡DIC影像之前,檢偏器與偏光器的方向成直角。檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振面的兩束光,從而使二者發(fā)生干涉。x和y波的光程差決定著透光的多少。光程差值為0時,沒有光穿過檢偏器;光程差值等于波長一半時,穿過的光達到zui大值。于是在灰色的背景上,標本結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出亮暗差。為了使影像的反差達到*狀態(tài),可通過調(diào)節(jié)DIC滑行器的縱行微調(diào)來改變光程差,光程差可改變影像的亮度。調(diào)節(jié)DIC滑行器可使標本的細微結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出正或負的投影形象,通常是一側(cè)亮,而另一側(cè)暗,這便造成了標本的人為三維立體感,類似大理石上的浮雕。
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