百歐博偉生物：菌株是微生物實驗室檢驗工作中的重要生物資源，常用于培養(yǎng)基驗收、試驗對照、人員培訓考核、方法確認等方面的質(zhì)量控制。因此為了確保工作菌株的生物特性和純度、實現(xiàn)工作菌株方便快捷的使用及溯源，菌種的相關(guān)管理工作在微生物實驗室就顯得尤為重要，按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結(jié)果一致性的重要保證。今天小編就“微生物實驗室菌株管理及使用”主題和大家做一個交流分享。

菌株管理及相關(guān)概念

1、幾個概念

標準菌株：即0代菌種，是指從菌種保藏機構(gòu)獲得并至少定義到屬或種的水平的菌株。實驗室的標準菌株應(yīng)有明確來源。

標準儲備菌株：從國內(nèi)或國外菌種保藏機構(gòu)獲得的標準菌株經(jīng)過復活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后，即為標準貯備菌株。

儲存菌株：儲存菌株通常從凍干或超低溫保存的標準儲存菌株進行制備。

工作菌株：標準儲備菌株或儲存菌株經(jīng)繼代培養(yǎng)后得到的菌株。工作菌株不可替代標準菌株。

標準培養(yǎng)物：標準菌株、標準儲備菌株、工作菌株的統(tǒng)稱。

商業(yè)派生菌株：即用型與標準菌株所有相關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)衍生物。常見的有定量工作菌株。

2、標準菌株的獲取

藥品微生物檢驗用的試驗菌應(yīng)為有明確來源的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株。

標準菌株應(yīng)來自認可的國內(nèi)或國外菌種保藏機構(gòu)。中國藥典2020版以及國標中涉及的菌株主要來自于兩大菌種保藏中心：中國醫(yī)學細菌保藏管理中心（CMCC）、美國標準菌種保藏中心（ATCC）。

菌株購買前需根據(jù)實驗室檢測需求制定采購計劃，經(jīng)審批后，向認可的國內(nèi)或國外的菌種保藏機構(gòu)購買標準菌株。標準菌株到達實驗室后，菌種管理人應(yīng)檢查其名稱、數(shù)量以及每一支的完整性，同時將菌種的所有信息填寫記錄（包括菌種名稱、編號、數(shù)量、代數(shù)、來源、接收日期、接收人等），并將其貯存在規(guī)定溫度的冰箱里。

3、標準菌株的復蘇、復壯和保存

標準菌株的復蘇、復壯或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按已驗證的方法進行。復蘇、復壯應(yīng)選擇營養(yǎng)成分豐富且全面的培養(yǎng)基（例如：TSA/TSB/NA/NB/SDB/SDA等），一般不使用選擇性較強的培養(yǎng)基；特殊的一些菌株在普通的培養(yǎng)基上生長不好，可能還需添加生長因子。

標準儲備菌株應(yīng)進行純度和特性確認。純度確認包括：平板劃線查看菌落形態(tài)、革蘭氏染色、顯微鏡觀察菌體形態(tài)等；關(guān)鍵特性確認可選擇：特征生化反應(yīng)確認、試劑盒鑒定、菌種鑒定儀鑒定等。需要注意的是，從開啟、復蘇、復壯到純度和特性的確認，都應(yīng)做好實驗記錄。

標準儲備菌株保存時，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中，藥典建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍（低于-30℃）等方法保存。低于-70℃或低溫冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。菌種應(yīng)設(shè)專人管理，菌種保藏的地點應(yīng)采取一定的措施使非管理者不能輕易獲取，例如加鎖保管，雙人保管等。

標準儲備菌株可用于制備每月或每周1次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。

從保藏機構(gòu)獲取的凍干菌種為0代菌種，每轉(zhuǎn)接一次增加一代（1代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何形式的轉(zhuǎn)種均被認為傳代一次），工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴格控制，不得超過5代，以防止過度的傳代增加菌株變異的風險。

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