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            PCR應(yīng)用中存在的問題2023/08/10
            
					
            
				開展PCR應(yīng)具有一定的條件。需要一個正規(guī)的pCR實驗室，采集標(biāo)本、核酸提取、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析應(yīng)在不同的房間進(jìn)行；需有嚴(yán)密的防污染措施、假陽性和假陰性結(jié)果的質(zhì)控等。實驗者應(yīng)具有一定的分子生物學(xué)理論知識及實驗技能，能夠及時發(fā)現(xiàn)和糾正實驗中的問題。目前，我國在PCR應(yīng)用中尤其是在臨床診斷中存在問題較多，主要表現(xiàn)為：PCR試劑的考核、審查工作薄弱，許多單位實驗條件不符合要求，部分操作人員的理論和實驗知識水平較低。PCR的應(yīng)用范圍過寬等，因此造成PCR實驗結(jié)果的可靠性差，出現(xiàn)較多的假陽性、假陰性結(jié)果。一、假
					
            
				
            
								
            
					
            PCR技術(shù)基本原理2023/08/10
            
					
            
				1.PCR技術(shù)基本原理PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在TaqD
					
            
				
            
								
            
					
            電泳儀常見問題處理方法2023/08/09
            
					
            
				注意事項1、電泳中使用的溴化乙錠（EB）為中度毒性、強(qiáng)致癌性物質(zhì)，務(wù)必小心，勿沾染于衣物、皮膚、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在專門電泳區(qū)域操作，戴一次性手套，并及時更換。2、預(yù)先加入EB時可能使DNA的運(yùn)動速度下降15%左右，且不同構(gòu)型的DNA的影響程度不同。所以為取得較真實的電泳結(jié)果可以在電泳結(jié)束后再用0.5μg/ml的EB溶液浸泡染色。EB在光照下易降解，若凝膠放置一段時間后才觀察，即使原來膠內(nèi)或樣品已加EB，建議選擇EB溶液浸泡染色。3、加樣進(jìn)膠時不要形成氣泡，需在凝膠液未凝固之前及時**
					
            
				
            
								
            
					
            瓊脂糖凝膠電泳的原理介紹2023/08/09
            
					
            
				實驗原理瓊脂糖凝膠電泳常用于分離、鑒定DNA、RNA分子混合物，以瓊脂凝膠作為支持物，利用DNA分子在電場中時的電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，達(dá)到分離混合物的目的。DNA分子在高于其等電點的溶液中帶負(fù)電，在電場中由陰極向陽極運(yùn)動。在一定的電場強(qiáng)度下，忽略DNA分子攜帶的電荷，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即分子本身的大小和構(gòu)型是主要的影響因素。DNA分子的遷移速度與相對分子量成反比。不同構(gòu)型的DNA分子的遷移速度不同。如環(huán)形DNA分子樣品，其中有三種構(gòu)型的分子：超螺旋分子（cccDNA）、開環(huán)分
					
            
				
            
								
            
					
            做電泳實驗常見條帶問題分析詳解2023/08/09
            
					
            
				一、微笑形區(qū)帶（兩邊翹起，中間凹下）：形成原因：主要是由凝膠中間部分凝固不均勻引起的，多出現(xiàn)于較厚的凝膠中。處理辦法：待其充分凝固再做實驗。二、皺眉形區(qū)帶（兩邊向下，中間鼓起）：形成原因：主要出現(xiàn)在蛋白質(zhì)垂直電泳槽中，一般是由兩板之間的底部間隙氣泡未排除干凈引起的。處理辦法：可在兩板之間加入適量緩沖液，以排除氣泡。三、區(qū)帶拖尾：形成原因：主要是由樣品溶解效果不佳或分離膠濃度過大引起的。處理辦法：加樣前離心；選擇適當(dāng)?shù)臉悠肪彌_液，加適量樣品促溶劑；電泳緩沖液放置時間過長，重新配制；降低凝膠濃度。四
					
            
				
            
								
            
					
            夾芯式垂直電泳槽使用方法2023/08/09
            
					
            
				一、組成部件(一)裝有鉑金絲的貯液槽一對，配有冷卻裝置及電泳緩沖液流出口。(二)凹型橡膠框，配有玻璃板，可分別制作厚度為lmm、1.5mm的凝膠板，操作時根據(jù)需要選擇適當(dāng)厚度的玻璃板及梳子配套使用。(三)樣品孔模具(梳子)用于電泳加樣。(四)固定貯液槽的螺絲桿及螺母4對，28D、30型為5對。(五)橡膠管五根。兩根長的用于連接冷卻水的出入口；中等長度的兩根用于連接電極緩；中液的流出口；*短的一根用于連接貯液槽間的冷卻水。(六)導(dǎo)線1付。●二、使用方法(一)清洗部件上述部件組裝前要徹清洗干凈。尤其
					
            
				
            
								
            
					
            講解電泳儀的使用方法2023/08/09
            
					
            
				電泳儀：電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學(xué)領(lǐng)域中*常用的是瓊脂糖凝膠電泳。所謂電泳，是指帶電粒子在電場中的運(yùn)動，不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同，因此在電場中運(yùn)動速度不同，根據(jù)這一特征，應(yīng)用電泳法便可以對不同物質(zhì)進(jìn)行定
					
            
				
            
								
            
					
            日本奧林巴斯CKX53的使用說明2023/08/06
            
					
            
				奧林巴斯CKX53的使用說明及注意事項奧林巴斯CKX53為倒立的低倍普及型顯微鏡，用于細(xì)胞培養(yǎng)觀察。本產(chǎn)品不能用于其設(shè)計用途以外的任何其他目的。照明是汞燈光源U-RFL-T為顯微鏡提供光源。用戶在使用過程中如果未按照規(guī)定的方式使用該設(shè)備，可能會危及用戶的安全。此外，還可能損壞本產(chǎn)品。請務(wù)必按照使用說明使用本產(chǎn)品?！髯⒁猓悍乐垢腥救绻^察具有潛在感染性的標(biāo)本，請按照以下要求操作，以防止感染。?使用防護(hù)用具，比如手套等。請使用防護(hù)用具，比如手套等，以防皮膚直接接觸到標(biāo)本。保養(yǎng)可能已接觸標(biāo)本的產(chǎn)品時，
					
            
				
            
								
            
					
            Veritipro PCR儀售后維修與使用操作步驟2023/08/06
            
					
            
				ABIVeritiProPCR儀售后維修與使用操作步驟：BIVeritiProPCR儀操作步驟1、打開PCR儀的熱蓋，插入0.2ml的樣品管。蓋好熱蓋。2、打開PCR儀的電源，儀器程序開始初始化，需等待幾分鐘。3、初始化完成后，顯示主菜單：4、點“Browse/NewMethods”，進(jìn)入PCR程序列表：5、可以直接點一個PCR程序，選擇“StartRun”運(yùn)行；點右邊的符號，可以選擇不同的文件夾。如要新建一個PCR程序，點“New”，出現(xiàn)PCR程序：6、添加一段程序：點中上方的“Stage”位
					
            
				
            
								
            
					
            PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件2023/08/06
            
					
            
				PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件--------------------------------------------------------------------------------標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系：10×擴(kuò)增緩沖液10ul4種dNTP混合物各200umol/L引物各10～100pmol模板DNA0.1～2ugTaqDNA聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L加雙或三蒸水至100ulPCR反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物：引物是PCR特異
					
            
				
            
								
            
					
            PCR儀的種類講解2023/08/06
            
					
            
				【PCR儀的種類】分類總是五花八門，總體來說可以分為PCR擴(kuò)增儀和實時熒光PCR儀兩大類，有人也把它們稱為半自動和全自動，或者定性和定量，都是比較不準(zhǔn)確的稱呼。PCR最重要的就是個升降溫過程，最初的水浴鍋式PCR，就是三個水浴箱，一個機(jī)械臂，定時抓出反應(yīng)槽轉(zhuǎn)換水浴鍋。這種東東體積大，迅速慢，但其實結(jié)果并不比以后的PCR儀差，我現(xiàn)在都很欣賞。后來有人利用致冷和加熱做成了，固定位置升降溫的PCR擴(kuò)增儀。后來隨著定量技術(shù)的發(fā)展，有公司將擴(kuò)增儀和檢測做成一體，也就成了現(xiàn)在所謂的全自動（或定量）PCR儀。
					
            
				
            
								
            
					
            降落PCR的原理及常見問題講解2023/08/06
            
					
            
				提問：降落PCR（TouchdownPCR）的原理？回答：TouchdownPCR是指每隔一個循環(huán)降低1°C反應(yīng)退火溫度，直至達(dá)到“Touchdown”退火溫度，然后以此退火溫度進(jìn)行10個左右的循環(huán)。該方法最初出現(xiàn)是為了避開確定最佳退火溫度而進(jìn)行的復(fù)雜的反應(yīng)優(yōu)化過程。正確和非正確退火溫度之間的任何差異將造成每個循環(huán)PCR產(chǎn)物量的兩倍差異（每攝氏度造成4倍差異）。因此相對于非正確產(chǎn)物，正確的產(chǎn)物可以得到富集該方法的另一個應(yīng)用是在確定已知序列肽的DNA序列。具體過程如下：使用兩套與已知序列肽兩末端可
					
            
				
            
								
            
					
            抽真空操作方法原理2023/07/28
            
					
            
				一、為什么要抽真空。三洋松下制冰機(jī)制冷系統(tǒng)是利用某種制冷劑和潤滑油在系統(tǒng)內(nèi)的反復(fù)循環(huán)來實現(xiàn)其功能的。當(dāng)制冷設(shè)備安裝與維修時，必然有空氣進(jìn)入系統(tǒng)。空氣有氧氣、氮氣以及水蒸氣，所有這些對系統(tǒng)來說都是有害的。二、什么是抽真空。用真空泵從系統(tǒng)中排除空氣和其他不凝性氣體稱為系統(tǒng)的“抽真空”，系統(tǒng)中水蒸氣的排除稱為“脫水”。在采暖、通風(fēng)、空調(diào)和制冷行業(yè)，排除空氣與水蒸氣的過程稱為“抽真空”：抽氣+脫水=抽真空這些氣體會引起兩個問題：空氣中所含的氮氣稱為不凝性氣體，在冷凝器中不能冷凝，甚至像液體一樣流動；相反
					
            
				
            
								
            
					
            簡單介紹電泳槽的使用方法2023/07/28
            
					
            
				電泳槽的使用1、將凝膠密封條框放在平板上，然后將凹型玻璃板與平板玻璃重疊（圖1）。2、將兩塊玻璃立起來使其底端接觸桌面，用手將兩塊玻璃板夾住放入電泳槽內(nèi)，然后插入斜楔板（直面對玻璃，斜面對槽）到適中程度，即可灌膠（圖2，圖3）?！?、凝膠凝結(jié)后，輕輕取下梳子（圖4）。4、用手夾住兩塊玻璃板，上提斜楔板，使其松開，然后取下玻璃膠室去掉凝膠密封框，注意在上述過程中手始終給玻璃膠室一個壓緊力，再將玻璃膠室凹面朝里置入電泳槽，插入斜楔板，將緩沖液加至內(nèi)槽玻璃凹口以上，外槽緩沖液加到距玻璃上沿3mm處即可
					
            
				
            
								
            
					
            蛋白質(zhì)雙向電泳注意點2023/07/28
            
					
            
				蛋白質(zhì)的雙向電泳的第一向為等電聚焦（Isoelectrofocusing,IEF）,根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點不同進(jìn)行分離；第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進(jìn)行分離。經(jīng)過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質(zhì)分子的等電點和分子量信息。注意事項：1.一向聚焦與二向電泳之間需要平衡，時間視蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定，一般為10min，最多不超過15min。2.過量的上樣量會引起雙向圖形畸形，特別在一向聚焦時，當(dāng)樣品濃度超過5mg時，則蛋白質(zhì)凝聚和沉淀，使二向時產(chǎn)生水平和垂直條紋
					
            
				
            
								
            
					
            跑電泳注意事項2023/07/28
            
					
            
				影響電泳分離的主要因素：1.待分離生物大分子的性質(zhì)：待分離生物大分子所帶的電荷、分子大小和性質(zhì)都會對電泳有明顯影響。一般來說，子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形，則其電泳遷移速度越快。2.緩沖液的性質(zhì)：緩沖液的pH值會影響待分離生物大分子的解離程度，從而對其帶電性質(zhì)產(chǎn)生影響，溶液pH值距離其等電點愈遠(yuǎn)，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大，尤其對于蛋白質(zhì)等兩性分子，緩沖液pH還會影響到其電泳方向，當(dāng)緩沖液pH大于蛋白質(zhì)分子的等電點，蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，其電泳的方向是指向正極。為了保持
					
            
				
            
								
            
					
            電泳槽的使用方法2023/07/28
            
					
            
				電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學(xué)領(lǐng)域中常用的是瓊脂糖凝膠電泳。所謂電泳，是指帶電粒子在電場中的運(yùn)動，不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同，因此在電場中運(yùn)動速度不同，根據(jù)這一特征，應(yīng)用電泳法便可以對不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分
					
            
				
            
								
            
					
            實驗室超純水器操作規(guī)范2023/07/21
            
					
            
				不可否認(rèn)，實驗室超純水器的使用已日益頻繁，而且對于業(yè)內(nèi)人士來說，它的使用方法和操作規(guī)程已經(jīng)是輕車熟路了，但是我們在使用的過程中也有一些小小的操作細(xì)節(jié)被大家所忽略。雖說短時間內(nèi)可能沒什么問題，但是長久來說是非常嚴(yán)重的。今天小編就和大家說說實驗室超純器你沒注意到的那些細(xì)節(jié)吧！1、未排空設(shè)備中的水我們都知道，細(xì)菌可以在水處理系統(tǒng)中快速生長。而純水系統(tǒng)的增長量，取決于進(jìn)入系統(tǒng)的細(xì)菌數(shù)量，對于安裝超純水器的實驗室來說，如果不注意在下班后、周末休息或長時間放假時，未使用的水會在設(shè)備中停滯不前，這樣就會導(dǎo)致細(xì)
					
            
				
            
								
            
					
            快速選型實驗室超純水設(shè)備2023/07/21
            
					
            
				近日來，各大高校及科研院所都在如火如荼地采購儀器設(shè)備。在這場熱潮中，如何快速選型實驗室超純水機(jī)？我們一起來了解一下。首先，國產(chǎn)超純水機(jī)較進(jìn)口品牌而言更具有性價比，無論是產(chǎn)水水質(zhì)，還是性能參數(shù)都不亞于進(jìn)口的，在售后和后期耗材的維護(hù)上優(yōu)勢更明顯。大可放心選擇國產(chǎn)品牌超純水機(jī)。其次，在選擇國產(chǎn)品牌超純水機(jī)時還需注意以下幾個方面。第一須具備高效EDI制水模塊。我們知道進(jìn)口品牌密理博、賽默飛、賽多利斯等都主推EDI機(jī)型。EDI（Electrodeionization）又稱連續(xù)電除鹽技術(shù)，通過陰、陽離子膜對
					
            
				
            
								
            
					
            夏季使用實驗室純水機(jī)的五個注意事項2023/07/21
            
					
            
				實驗室純水機(jī)一般采用*的反滲透技術(shù)制造純水。純水機(jī)的工作原理是對水施加一定的壓力，使水分子和離子態(tài)的礦物質(zhì)元素通過反滲透膜，而溶解在水中的絕大部分無機(jī)鹽(包括重金屬)，有機(jī)物以及細(xì)菌、病毒等無法透過反滲透膜，從而使?jié)B透過的純凈水和無法滲透過的濃縮水嚴(yán)格的分開。反滲透膜上的孔徑只有0.0001微米，而病毒的直徑一般有0.02-0.4微米，普通細(xì)菌的直徑有0.4-1微米。純水機(jī)流出的水達(dá)到飲用水標(biāo)準(zhǔn)。下面我們來看看夏季使用實驗室純水機(jī)的五個注意事項：1、所有的實驗室純水機(jī)配件都要避免陽光直射近年來，
					
            
				
            
							
				
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