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2016
10-18

ELISA試劑盒是否符合要求
ELISA試劑盒是否符合要求方面一：檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問(wèn)題的能力，對(duì)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。方面二：使用校對(duì)過(guò)的微量移液器，排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要。方面三：仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方，反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。方面四：洗滌*洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性。洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底
2016
10-13

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）的操作步驟
的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證elisa檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn)，珠式、管式及磁性球ELSIA，國(guó)外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用，兩者均有詳細(xì)的使用說(shuō)明，嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。1保溫在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育(incubation)，有人稱(chēng)之為孵育，在ELI
2016
10-12

間接ELISA的操作程序
本法主要用于檢測(cè)抗體。以鴨病毒性肝炎（DVH）抗體的ELISA為例，間接ELISA的操作程序如下：(1)材料①包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液；②DVH包被抗原、酶標(biāo)抗抗體、陰性及陽(yáng)性DVH參考血清；待檢鴨血清；③ELISA檢測(cè)儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。(2)方法步驟①加抗原包被→4℃隔夜，洗滌三次、拋干②加待檢血清→37℃2小時(shí)，洗滌三次、拋干③加酶標(biāo)抗體→37℃2小時(shí)，洗滌三次、拋干④加底物液→37℃30分鐘，加終止液⑤用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值，并計(jì)算出P/N比值。(3)結(jié)果判定
2016
10-11

人轉(zhuǎn)移因子（TF）ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
人轉(zhuǎn)移因子(TF)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)：1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗；2.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份；3.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀釋過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存；4.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)；5.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用；6.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器；7.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻
2016
10-10

ELISA試劑盒基本原理
ELISA試劑盒基本原理①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏
2016
09-30

免疫球蛋白抗血清制備方法
免疫球蛋白抗血清制備方法此法用于制備間接法抗抗體。因抗原為可溶性，故多需加佐劑。（1）淋巴結(jié)注射法1）選擇體重2～3Kg的健康雄性家兔（2只以上），編號(hào)；2）在家兔兩后腳掌共注射活卡介苗，50mg（約0.6mL．每只足庶部皮下0.1mL，皮內(nèi)0.2mL）。7～10d后，鼠或國(guó)窩處淋巴結(jié)腫大如黃豆或蠶豆大小；3）用二指固定腫大之淋巴結(jié)，兩側(cè)淋巴結(jié)各注射加有*佐劑的抗原o．5mL，共1mL。事先將抗原稀釋為5～10mg/ml，在免疫前一日加入青、鏈霉素，使青、鏈霉素的濃度分別為1000U/mL和10
2016
09-28

ELISA試劑盒分析
ELISA試劑盒分析在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，所用的儀器及加樣過(guò)程都處于正常狀態(tài)的情況下，步驟均按照各種試劑說(shuō)明書(shū)的要求去做，排除實(shí)驗(yàn)所用儀器和操作步驟對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響外，ELISA試劑盒內(nèi)的空白、陰性和陽(yáng)性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控值都很正常，只有檢測(cè)的血液標(biāo)本情況異常。根據(jù)國(guó)家和疾控中心報(bào)告陽(yáng)性率的比例不應(yīng)該是很高的情況下，HBsAg在用ELISA之前都經(jīng)過(guò)了快速金標(biāo)試劑的檢測(cè)，陽(yáng)性標(biāo)本得到了一定的控制。因此，原因可能是在標(biāo)本的處理，特別是放置時(shí)間、離心速度和離心時(shí)間方面的問(wèn)題。所以，標(biāo)本的處理就成
2016
09-26

ELISA的樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
ELISA的樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，有條件的，-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。液體類(lèi)標(biāo)本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或
2016
09-23

ELISA診斷試劑盒使用中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法
ELISA診斷試劑盒使用中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)技術(shù)自問(wèn)世以來(lái)，因其所需儀器化程度低、操作簡(jiǎn)便、敏感度高、特異性強(qiáng)、特別適合于對(duì)大量樣本的篩檢工作等優(yōu)點(diǎn)在獸醫(yī)臨床檢驗(yàn)中被廣泛地應(yīng)用。但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)也會(huì)得到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。筆者在ELISA試劑盒的和應(yīng)用過(guò)程中對(duì)經(jīng)常出現(xiàn)的一些問(wèn)題進(jìn)行了分析和總結(jié)，現(xiàn)對(duì)ELISA試劑盒在使用過(guò)程中出現(xiàn)的一些問(wèn)題談一點(diǎn)自己的見(jiàn)解，希望對(duì)廣大同行及試驗(yàn)操作者有所幫助。
2016
09-18

ELISA試劑盒的優(yōu)勢(shì)
ELISA試劑盒的優(yōu)勢(shì)：1，嚴(yán)格的質(zhì)控體系：所有試劑盒從原料到成品經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控，確保試劑盒質(zhì)量及穩(wěn)定性。2，產(chǎn)品經(jīng)過(guò)不斷優(yōu)化，具有很好的靈敏度；3，綜合指標(biāo)特性，便捷操作的試劑盒；4，檢測(cè)驗(yàn)證樣本多樣；5，專(zhuān)業(yè)的團(tuán)隊(duì)為客戶提供個(gè)性化的定制服務(wù)；6，提供食品安全藥物殘留ELISA試劑盒，以及代測(cè)服務(wù)；7，多年實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)老師，保證勁馬生物ELISA試劑盒完善專(zhuān)業(yè)的售后服務(wù)；8，專(zhuān)業(yè)的代測(cè)服務(wù)：WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)，ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)代測(cè)，IHC實(shí)驗(yàn)代測(cè)，染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)。
2016
09-14

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的完善
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的完善①：評(píng)估試劑的實(shí)用性，試劑的穩(wěn)定與否，對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進(jìn)行陰、陽(yáng)對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn)，判定試劑符合要求后方可使用。②：操作前仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方，反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)，比如洗板次數(shù)的掌握等。③：加樣要準(zhǔn)確、快速。加樣不準(zhǔn)確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結(jié)果。另外，顯色的深淺及A值的測(cè)定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn)，如果
2016
09-12

干細(xì)胞老化的原因和預(yù)防
干細(xì)胞老化的原因和預(yù)防：接種密度的影響：部分干細(xì)胞具有一定的分泌性能，能夠分泌一些對(duì)細(xì)胞有支持能力的因子類(lèi)物質(zhì)；所以必須維持一定的接種密度，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖減慢，zui后出現(xiàn)老化；消化過(guò)度：消化細(xì)胞時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞的表面蛋白有較強(qiáng)的損傷，所以消化的時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，使用合適濃度和pH值的消化酶，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞老化和分化；合適的密度的時(shí)候就要傳代：細(xì)胞如果過(guò)密，接觸抑制作用會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的活力減弱并影響增殖導(dǎo)致老化；使用合適的血清和培養(yǎng)基：不同的干細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基特別是血清的要求不同，所以使用不同的培養(yǎng)用的血清進(jìn)
2016
09-09

大腸桿菌細(xì)胞制備流程
大腸桿菌細(xì)胞制備流程*天：1.將適合菌株(如XL1-Blue,DH5α)置于LB或其他營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上，在37°C下培養(yǎng)2.高溫滅菌大的離心瓶(250-500ml)以備第二天搖瓶用3.準(zhǔn)備幾瓶滅菌水(總量約1.5升)，保存于冷凍室中以備第二天重懸浮細(xì)胞用第二天：4.轉(zhuǎn)移0.2-1ml培養(yǎng)物至裝有500mlLB(或其他營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基)的1-2升搖瓶5.37°C下劇烈振蕩培養(yǎng)2-6小時(shí)6.定時(shí)監(jiān)控OD600值(培養(yǎng)1小時(shí)后每半小時(shí)測(cè)定一次)7.當(dāng)OD600值達(dá)到0.5-1.0時(shí)，從搖床中取出搖瓶
2016
09-07

ELISA試劑盒的組成
ELISA試劑盒的組成完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；（3）酶的底物；（4）陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品（定性測(cè)定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；（5）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；（7）酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的zui終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。
2016
09-05

做大鼠ELISA試劑盒的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
做大鼠ELISA試劑盒的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)1.正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、大鼠ELISA試劑盒兔血清或BSA等封閉。2.在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，大鼠ELISA試劑盒其中包括:（1）固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選
2016
09-02

菌株的保存使用
菌株又稱(chēng)品系,表示任何由一個(gè)獨(dú)立分離的單細(xì)胞(即單個(gè)病毒粒子)繁殖而成的純種群體及其后代。因此,一種微生物的每一個(gè)不同來(lái)源的純培養(yǎng)物均可稱(chēng)為該菌種的一個(gè)菌株。根據(jù)菌株的定義,菌株實(shí)際上是某一微生物達(dá)到“遺傳性純”的標(biāo)志,一旦菌株發(fā)生變異,均應(yīng)標(biāo)上新的菌株名稱(chēng)。當(dāng)進(jìn)行菌種保藏、篩選或科學(xué)研究時(shí),在進(jìn)行學(xué)術(shù)交流或發(fā)表論文時(shí),在利用菌種進(jìn)行時(shí),都必須同時(shí)標(biāo)明該菌種及菌株名稱(chēng)。菌株間在某些特性上存在著或多或少的差異.有一定的編號(hào).如蛋白酶的為枯草桿菌1398，淀粉酶的為枯草桿菌7658，同M屬枯草桿菌，
2016
08-31

培養(yǎng)基主要原料介紹
培養(yǎng)基主要原料介紹蛋白胨是一種外觀呈淡黃色的粉劑，具有肉香的特殊氣息。它作為微生物培養(yǎng)基的主要原料，在抗生素，醫(yī)藥工業(yè)，發(fā)酵工業(yè)，生化制品及微生物學(xué)科研等領(lǐng)域中的用量均很大；不同的生物體需要特定的氨基酸和多肽，因此存在各種蛋白胨，一般來(lái)說(shuō)，用于蛋白胨的蛋白包括動(dòng)物蛋白（酪蛋白、肉類(lèi)）和植物蛋白（豆類(lèi)）兩種。蛋白胨當(dāng)中不僅含有豐富的氨基酸，特別是含硫氨基酸較多，而且含有更多的細(xì)菌生長(zhǎng)需要的維生素和其它生長(zhǎng)因子。是生物制藥發(fā)酵及各種培養(yǎng)基制備的基礎(chǔ)原材料。在培養(yǎng)基當(dāng)中它起的主要作用是提供氮源。胰酪蛋
2016
08-31

免疫組化中抗體選擇要求
免疫組化中抗體選擇要求1、一抗選擇要點(diǎn)（1）選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合，就象地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱(chēng)為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)較低；而多克隆抗體特異性稍弱，抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過(guò)封閉等有所避免）。（2）種屬來(lái)源。一般家兔來(lái)
2016
08-29

如何靈活的挑選ELISA測(cè)試盒
如何靈活的挑選ELISA測(cè)試盒怎樣靈活應(yīng)用ELISA這個(gè)檢測(cè)方法以及怎樣去挑選ELISA測(cè)試盒。ELISA這個(gè)方法的原理，大家都很明白，網(wǎng)上的資料很多?？烧嬲闷饋?lái)的時(shí)候，偶然間就會(huì)有點(diǎn)犯糊涂，我談一下自己的理解。1、有些客戶會(huì)用OVA（卵清卵白）做一些哮喘，過(guò)敏性腸炎的模型，然后會(huì)檢測(cè)粘膜特異性的sIgA以及血清內(nèi)里IgG，IgE等指標(biāo)。2、NO的檢測(cè)，一般都是采用經(jīng)典的Greiss法，如今市場(chǎng)上竟然有NOELISA試劑盒，真是徹夜未眠也搞不明白。另外還有做氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA的檢測(cè)，我推薦EL
2016
08-26

鑒定血清質(zhì)量
鑒定血清質(zhì)量1．親和性（affinity）是指抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合部位與相應(yīng)的抗原決定簇之間的結(jié)合強(qiáng)度，常用親和常數(shù)Ka表示。Ka是正／逆向反應(yīng)速度常數(shù)的比值，單位為稀釋度單位（L／mol或LM-1），表示需將lmol抗體稀釋至多少升，才能使抗原—抗體結(jié)合下降50％；而Ka的倒數(shù)為解離常數(shù)（Kd），其單位為濃度單位（mol／L）。為提高放射免疫分析的靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度，需選用Ka值高（109一1012L／mo1）的抗血清。2．特異性（specificity）是指一種抗體識(shí)別相應(yīng)抗原決定簇的

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