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						蒂科（上海）生物科技有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第10年
            
					
            
				
            
			
            
		
            
	
            
	
	
            
		
            
			
		
            
	
            

            

	
            
		
            
			
			
            
							
            
					
            成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)方法分享2023/06/12
            
					
            
				分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)一開(kāi)始并不涉及成骨作用，而主要是用于研究細(xì)胞的老化、各種外來(lái)因子對(duì)細(xì)胞的損傷、細(xì)胞在體外條件下的惡性轉(zhuǎn)化、以及某些先天性代謝異常、酶缺陷等。由于皮膚成纖維細(xì)胞易于獲取，又易于在體外生長(zhǎng)，皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)已在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究中得到較廣泛的運(yùn)用，其分離培養(yǎng)技術(shù)已相對(duì)成熟，對(duì)其體外生長(zhǎng)規(guī)律也有了較全面的認(rèn)識(shí)。原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)可用酶消化法或組織塊法，其中組織塊法又因其操作簡(jiǎn)便、條件易于控制而應(yīng)用更為普遍。通常，以酶消化法獲得的成纖維細(xì)胞懸液在接種后5～10
					
            
				
            
								
            
					
            幾種原代細(xì)胞傳代方法2023/06/05
            
					
            
				原代細(xì)胞是指從機(jī)體的組織（如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等）經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。一股認(rèn)為，培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)抱培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細(xì)胞生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代，進(jìn)行細(xì)胞生命過(guò)程、細(xì)胞瘍變、細(xì)胞工程等問(wèn)題的研究。那么關(guān)于原代細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，我們應(yīng)該怎么做呢?一股有以下兩種方法：一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液（胰蛋白鱷或與EDTA混合液）輕輕接動(dòng)
					
            
				
            
								
            
					
            如何保證血清活性？2023/05/29
            
					
            
				常規(guī)儲(chǔ)存首先，剛到貨的血清，趁著它還凍手，趕緊放進(jìn)-20℃冰箱中，避免反復(fù)凍融。當(dāng)然，如果你的課題組不差錢(qián)，-80℃冰箱空間充足，把血清儲(chǔ)存進(jìn)去也是沒(méi)有問(wèn)題的。如何解凍放4℃過(guò)夜直接在4℃冰箱里過(guò)夜融化的方法，雖然很多人在這么用，但還是有一些潛在的風(fēng)險(xiǎn)的。我們都知道，在血清這種混合物中，融化速度：蛋白質(zhì)等干物質(zhì)水這類溶劑，所以蛋白質(zhì)會(huì)先溶解析出，而水還是結(jié)成冰的狀態(tài)，導(dǎo)致瓶子中間會(huì)出現(xiàn)一根透明的冰柱，而周?chē)鷦t會(huì)呈現(xiàn)上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài)，在使用過(guò)程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過(guò)高等
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題2023/05/15
            
					
            
				一、轉(zhuǎn)染效率低影響轉(zhuǎn)染效率因素很多，主要因素有細(xì)胞培養(yǎng)物、血清、載體構(gòu)建、DNA質(zhì)量以及轉(zhuǎn)染技術(shù)等。1.沒(méi)有使用優(yōu)化條件：優(yōu)化陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑和DNA的量。2.DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑復(fù)合物在存在血清條件下形成。3.存在抑制劑：不要在用于制備DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物的培養(yǎng)基中使用抗生素，EDTA，檸檬酸鹽，磷酸鹽，RPMI，硫酸軟骨素。透明質(zhì)酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。4.不恰當(dāng)?shù)募?xì)胞密度：轉(zhuǎn)染時(shí)融合度應(yīng)為70%-90%。5.陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑凍結(jié)：不要使用凍結(jié)的或儲(chǔ)存溫度低于4℃的陽(yáng)離子
					
            
				
            
								
            
					
            血清的具體實(shí)驗(yàn)作用你了解多少？2023/05/08
            
					
            
				①有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。②是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。③提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。④起酸堿度緩沖液作用。⑤提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。⑥提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。血清性狀、外觀：淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。血清指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指
					
            
				
            
								
            
					
            干細(xì)胞外泌體知多少？2023/04/24
            
					
            
				2013年諾貝爾獎(jiǎng)中，美國(guó)科學(xué)家詹姆斯·羅斯曼等三人發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞的囊泡運(yùn)輸調(diào)控機(jī)制，外泌體是囊泡的其中一種。外泌體(exosomes)是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，直徑大約為30-150nm(頭發(fā)絲的1/1000)。外泌體廣泛存在并分布于各種體液中，攜帶和傳遞重要的信號(hào)分子，形成了一種全新的細(xì)胞-細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng)，影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。干細(xì)胞
					
            
				
            
								
            
					
            DMEM高糖、DMEM低糖、DMEM/F-12培養(yǎng)基到底啥差別？2023/04/18
            
					
            
				DMEM高糖培養(yǎng)基DMEM高糖培養(yǎng)基是在MEM培養(yǎng)基基礎(chǔ)上改良而來(lái)，目前已廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞的培養(yǎng)。DMEM高糖培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于生長(zhǎng)快、粘附性低的細(xì)胞?？捎糜诙喾N哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞的培養(yǎng)，例如原代成纖維細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、HUVEC、平滑肌細(xì)胞等，也可以用于一些細(xì)胞系的培養(yǎng)，例如Hela、293、Cos-7及PC-12等。DMEM低糖培養(yǎng)基DMEM低糖培養(yǎng)基是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。DMEM低糖培養(yǎng)基適合代謝作用慢、依賴性貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。DMEM/F-12培
					
            
				
            
								
            
					
            原代細(xì)胞與細(xì)胞系怎么選擇？2023/04/11
            
					
            
				原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，一般認(rèn)為，原代細(xì)胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株。當(dāng)細(xì)胞傳至50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。細(xì)胞系因其容易培養(yǎng)、種類多、產(chǎn)量可觀的優(yōu)點(diǎn)一直是細(xì)胞水平研究的Shou選
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)液渾濁原因分析2023/04/04
            
					
            
				培養(yǎng)基變渾濁的原因可能有如下幾點(diǎn)：1、細(xì)胞存在污染，污染早期可以見(jiàn)到細(xì)胞生長(zhǎng)；2、不排除傳代時(shí)細(xì)胞密度過(guò)大，或者操作不當(dāng)導(dǎo)致多數(shù)細(xì)胞不貼壁，大量細(xì)胞漂浮。3、細(xì)胞破碎。細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲(chóng)污染、黑膠蟲(chóng)污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染.他們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯.2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)
					
            
				
            
								
            
					
            在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中血清熱滅活的作用和意義2023/03/31
            
					
            
				一、血清滅活的目的是什么？1、血清熱滅活目的主要是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒(méi)有必要。2、實(shí)驗(yàn)員曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測(cè)定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過(guò)補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn)，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過(guò)程，也對(duì)熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。3、熱滅活另一個(gè)目的是為了使支原體失活。二、血清使用前是
					
            
				
            
								
            
					
            常規(guī)培養(yǎng)基的配制流程介紹2023/03/28
            
					
            
				1、計(jì)算稱量根據(jù)待檢樣品屬性計(jì)算出所需的不同培養(yǎng)基的體積，根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行準(zhǔn)確稱量；電子天平需開(kāi)機(jī)預(yù)熱30min后使用，稱量過(guò)程中手要穩(wěn)，避免將培養(yǎng)基灑落在天平稱量盤(pán)中，若灑落，應(yīng)立即停止稱量，使用潔凈布擦干粉末，重新調(diào)“0”后稱量。2、溶化對(duì)于可溶性淀粉,先用少量冷水調(diào)成糊狀,再放入沸水中；不易溶解的培養(yǎng)基，先加入少量純化水振搖溶解后，二次加水配制；需分裝的培養(yǎng)基，需溶解，含瓊脂的培養(yǎng)基需加熱融化，溶解后，分裝至不同容器中進(jìn)行滅菌。3、分裝如果要制作斜面培養(yǎng)基，須將培養(yǎng)基分裝于試管中。如果要制作
					
            
				
            
								
            
					
            ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物（超敏）的操作步驟2023/03/22
            
					
            
				ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物（超敏）可為使用辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)物的免疫印跡實(shí)驗(yàn)提供明亮的信號(hào)和低皮克級(jí)檢測(cè)靈敏度。該ECL底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液，以出色性能、通用性和高性價(jià)比，滿足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。操作步驟：1、執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)模和WesternBlot步驟。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。2、WesternBlot最后一次洗模的同時(shí)配置發(fā)光工作液：分別取等體積的A液和B液，放入干凈容器中混合（注意吸取A液和B液的吸頭一定
					
            
				
            
								
            
					
            什么是牛血清白蛋白？2023/03/20
            
					
            
				牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一種球蛋白，包含607個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點(diǎn)為4.7。應(yīng)用：牛血清白蛋白（BSA）在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，例如在WB實(shí)驗(yàn)中加入BSA，通過(guò)提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對(duì)酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性減輕不利環(huán)境因素，如加熱、表面張力及化學(xué)因素引起的變性。測(cè)定蛋白濃度按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標(biāo)準(zhǔn)）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)基需要更換哪些指標(biāo)呢？2023/03/15
            
					
            
				無(wú)論是原代培養(yǎng)還是細(xì)胞系的傳代培養(yǎng)，一旦培養(yǎng)開(kāi)始，就要定期更換或補(bǔ)充培養(yǎng)基。如果細(xì)胞持續(xù)增殖，隨后遲早要進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)干不增殖的培養(yǎng)物，也需要定期更換培養(yǎng)基，因?yàn)榧?xì)胞仍會(huì)代謝，培養(yǎng)基的某些成分會(huì)耗盡或自然降解，產(chǎn)生的代謝廢物也需要通過(guò)換液去除。細(xì)胞傳代間隔在不同細(xì)胞系中因生長(zhǎng)速率和新陳代謝的不同而不同?？焖偕L(zhǎng)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，如HeLa細(xì)胞系，通常每周傳代一次，四天后換液。生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞系，特別是非轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系，可能每?jī)芍?、三周甚至四周傳代一次，兩次傳代之間每周換液。有四個(gè)指標(biāo)表示需要更換培養(yǎng)基
					
            
				
            
								
            
					
            動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)4大常用合成培養(yǎng)基2023/03/07
            
					
            
				體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞已經(jīng)有近百年的歷史，但該技術(shù)真正得以廣泛應(yīng)用及各種類型組織細(xì)胞大量體外培養(yǎng)成功是由于適合細(xì)胞體外生長(zhǎng)需要的合成培養(yǎng)基的問(wèn)世。合成培養(yǎng)基是對(duì)細(xì)胞體內(nèi)生存環(huán)境中各種已知物質(zhì)在體外人工條件下的模擬。這種模擬不是被動(dòng)的、不加選擇的，而是在體外反復(fù)實(shí)驗(yàn)和篩選，進(jìn)行強(qiáng)化和重新組合后形成的人工合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基種類很多，據(jù)報(bào)道已有數(shù)十種，每種合成培養(yǎng)基最初都是為培養(yǎng)某種細(xì)胞而設(shè)計(jì)的，但應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)其他細(xì)胞也可以生長(zhǎng)或經(jīng)改良也適合其他細(xì)胞的生長(zhǎng)。01.199培養(yǎng)基199培養(yǎng)基是Morgan、M
					
            
				
            
								
            
					
            pH緩沖液的使用方法和配制保存2023/03/02
            
					
            
				pH緩沖液是確保pH測(cè)量值精確的重要因素。標(biāo)準(zhǔn)緩沖液用于校準(zhǔn)pH傳感器和檢查其性能。pH緩沖液的緩沖能力是其重要的屬性。即使將外部物質(zhì)加入緩沖液中，這一屬性仍可使pH緩沖液保持恒定的pH值。pH緩沖液使用方法：首先取少量校正液潤(rùn)洗小量杯，然后加入適量校正液（液面高度沒(méi)過(guò)電極的感應(yīng)探頭即可）。按照電子pH測(cè)試筆使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行校正。由于校正液是高精密的液體，是電子ph測(cè)試筆精確度的保障，因此用過(guò)的校正液不能再倒回瓶中，以免影響校正液精度，帶入細(xì)菌等，造成校正液無(wú)法繼續(xù)使用。pH緩沖液的配制及其保存：
					
            
				
            
								
            
					
            酪蛋白的作用2023/02/27
            
					
            
				酪蛋白是哺乳動(dòng)物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白質(zhì)，又稱：干酪素、酪朊、乳酪素。α-酪蛋白是哺乳動(dòng)物的主要蛋白，人乳中沒(méi)有α-酪蛋白，以β-酪蛋白為主要酪蛋白形式。酪蛋白對(duì)幼兒既是氨基酸的來(lái)源，也是鈣和磷的來(lái)源，酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。作用：酸酪蛋白主要用作涂料的基料，木、紙和布的粘合劑，食品用添加劑等。作為涂料的基料約占總消費(fèi)的一半，具有優(yōu)良的耐水性，在顏料中能很好地分散，提高涂料的均勻性。此外，因流動(dòng)性好，易于涂裝施工，粗制凝乳酶蛋白主要用于制造塑料鈕扣。酪蛋白鈕扣與其他樹(shù)脂鈕扣相比，染
					
            
				
            
								
            
					
            影響細(xì)胞培養(yǎng)的有哪些因素？2023/02/23
            
					
            
				環(huán)境因素1．無(wú)菌環(huán)境無(wú)毒和無(wú)菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件。細(xì)胞在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過(guò)程中，缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)而喪失對(duì)微生物的防御能力和對(duì)有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細(xì)胞能在體外環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖，必須要確保無(wú)菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無(wú)菌試劑和培養(yǎng)基以及無(wú)菌操作。常見(jiàn)的微生物污染有支原體、細(xì)菌、真菌。支原體無(wú)致死毒性，可與細(xì)胞長(zhǎng)期共存，對(duì)細(xì)胞有潛在影響，但體積小，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)菌增殖快
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)可以分哪幾類？2023/02/21
            
					
            
				細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等），使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)bi不可少的過(guò)程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)?？寺　＜?xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)bi不可少的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)
					
            
				
            
								
            
					
            培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，胎牛血清提供什么幫助？2023/02/15
            
					
            
				1.提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的天然激素或天然生長(zhǎng)因子,如胰島素、IGFII等。2.提供天然的結(jié)合蛋白如胎球蛋白、白蛋白等，能識(shí)別氨基酸、脂質(zhì)、金屬離子和激素等，能結(jié)合并調(diào)節(jié)它們的活性。胎球蛋白（Fetuin），具有多個(gè)鈣離子結(jié)合位點(diǎn)，能調(diào)節(jié)血清中的鈣離子濃度。3.提供細(xì)胞外基質(zhì)成分，便于細(xì)胞粘附、貼壁、鋪展。當(dāng)然，有些細(xì)胞也能分泌部分外基質(zhì)成分，但血清中的更不可少。4.提供解毒和抗氧化功能。如牛血清中有金屬硫蛋白，銅藍(lán)蛋白等。對(duì)多種重金屬有高度親和性，并可清除細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的氧自由基（·O），可防止細(xì)胞
					
            
				
            
							
				
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