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						蒂科（上海）生物科技有限公司
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            胰酶的配置方法你知道嗎？2022/10/11
            
					
            
				胰酶配置方法：1、培養(yǎng)液配制，方便好用，對細(xì)胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制，要先調(diào)ph值7.2到7.4（①胰酶（1：250）2.5克②EDTA-Na0.3克③NaCl8.0克④KCl0.4克⑤Glucose1.0克⑥PhenolRed0.005克⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時，調(diào)pH7.8-8.0，過濾除菌。）3、pbs（0.1%胰酶溶液的配制：稱取胰酶粉末0.1g，先用少許滅菌過的PBS調(diào)成糊狀，然后補(bǔ)足到100ml。置室溫攪拌4小時或冰箱內(nèi)過夜
					
            
				
            
								
            
					
            胰酶使用的注意事項(xiàng)2022/10/10
            
					
            
				胰酶使用注意：1、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。2、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差。貼壁細(xì)胞的消化：1、吸去培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清2、加入少量胰酶細(xì)胞消化液，略蓋過細(xì)胞即可，根據(jù)胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘（不同的細(xì)胞消化時間有所不同）3、顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)
					
            
				
            
								
            
					
            新生牛血清蛋白檢測指標(biāo)2022/10/09
            
					
            
				新生牛血清（NewbornCalfSerum）是來自剛出生~出生后2周內(nèi)的新生牛靜脈取血。經(jīng)大規(guī)?；旌虾蟪^濾制成成品，主要用于動物細(xì)胞培養(yǎng)，是醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品的重要原材料之一，其質(zhì)量好壞直接影響細(xì)胞生長情況?？偟鞍缀渴切律Ｑ逍枰獧z查的指標(biāo)。它屬于化學(xué)成分的初步分析。有人統(tǒng)計過國產(chǎn)新生牛血清的蛋白含量1，在比較各產(chǎn)區(qū)各年份后，發(fā)現(xiàn)其含量在3.7%~4.4%之間。進(jìn)口新生牛血清并不與之*一致。因?yàn)閲鴥?nèi)的血清常采自奶牛，而國外的血清常采自肉牛。蛋白質(zhì)是新生牛血清的主要成分，在細(xì)胞培養(yǎng)中起著維
					
            
				
            
								
            
					
            血清融化后有沉淀怎么辦？影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎？2022/09/29
            
					
            
				血清沉淀主要是纖維蛋白等蛋白、磷酸鹽、脂類等經(jīng)凍融后析出，導(dǎo)致血清內(nèi)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，該現(xiàn)象與血清品質(zhì)無關(guān)，大部分品牌的血清都會有這種情況，不會影響細(xì)胞培養(yǎng)，只是培養(yǎng)時可能偶爾觀察到血清沉淀，注意區(qū)分血清沉淀和細(xì)胞污染即可。血清沉淀較多時可以將血清靜置后，盡量吸走上清，下部有大量沉淀的血清可以2000rpm離心5min后取上清與之前取的上清混合使用。血清反復(fù)凍融、高溫融化、融化不均、滅活等因素均有可能導(dǎo)致沉淀增多，血清融化時應(yīng)盡量在4℃融化，每隔一段時間搖晃一下。HAKATA胎牛血清產(chǎn)品特點(diǎn)1、內(nèi)毒
					
            
				
            
								
            
					
            動物血清的正確熱滅活方法2022/09/28
            
					
            
				動物血清的熱滅活非常容易造成蛋白析出增多，若非必要，可以無需做此操作。若必須做動物血清的熱滅活，請嚴(yán)格遵守以下步驟：1、保證血清*融化狀態(tài)，溫度接近常溫。2、保證水浴溫度56℃、30分鐘的原則，在水浴過程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子，使血清內(nèi)部受熱均勻，直至滅活時間結(jié)束。注意事項(xiàng)：溫度過高、時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多，甚至嚴(yán)重影響血清的品質(zhì)。在56℃水浴中，持續(xù)恒溫30分鐘。在此過程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子，使其受熱均勻，減少蛋白的析出。為什么要熱滅活血清？加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)中常用培養(yǎng)基介紹2022/09/26
            
					
            
				1、RPMI-1640MediumRPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動物、特殊造血細(xì)胞、正?；驉盒栽錾陌准?xì)胞，雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。2、MinimumEssentialMedium（MEM）也稱zui低必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡單，可廣泛適應(yīng)各種已建成細(xì)胞系和不同地方的哺乳動物細(xì)
					
            
				
            
								
            
					
            培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)菌污染怎么判斷？2022/09/23
            
					
            
				培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)菌污染怎么判斷？細(xì)菌污染的細(xì)胞過夜培養(yǎng)后，培養(yǎng)基會顯著變黃，培養(yǎng)瓶內(nèi)肉眼可見細(xì)菌沉淀，晃動培養(yǎng)基會有渾濁現(xiàn)象，顯微鏡下觀察細(xì)胞可以看到很細(xì)的沙狀物覆蓋整個培養(yǎng)瓶底部。細(xì)胞碎片與污染的分辨可以通過過夜培養(yǎng)判斷，過夜不會渾濁的主要是細(xì)胞碎片及代謝產(chǎn)物，過夜會明顯變黃渾濁的可以判斷為污染。細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)菌污染一般1-2天即會爆發(fā)至肉眼可見狀態(tài)，細(xì)菌污染一般不會交叉污染，及時處理掉污染的細(xì)胞即可。培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)菌污染怎么判斷？細(xì)菌污染的細(xì)胞過夜培養(yǎng)后，培養(yǎng)基會顯著變黃，培養(yǎng)瓶內(nèi)肉眼可見細(xì)菌
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞凍存時，培養(yǎng)基、血清、DMSO按什么比例配制？2022/09/22
            
					
            
				DMSO是目前常用的細(xì)胞凍存保護(hù)劑，一般使用時終濃度控制在5~10%，最佳濃度取決于細(xì)胞類型。一般來說，存活率比較高的細(xì)胞系，培養(yǎng)基、血清、DMSO按照7：2：1的比例新鮮配制使用。細(xì)胞計數(shù)后，用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，至5×10^6~1×10^7cells/mL，然后1~1.5mL/管分裝凍存。對于存活率較低的細(xì)胞系，或者需要長時間保存的細(xì)胞系，可以增加凍存液中的血清濃度，血清和DMSO按9：1的比例配制。另外，還有商品化的無血清凍存液可以選擇，不需要預(yù)先配制。一般會含有多種保護(hù)劑成分，適
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)瓶的使用方法2022/09/21
            
					
            
				細(xì)胞培養(yǎng)瓶使用方法：1.擰開蓋子，用傾斜或者泵打的方式將培養(yǎng)基注入細(xì)胞工廠內(nèi)，細(xì)胞懸液緩慢流入細(xì)胞工廠各層中。蓋上蓋子，靜止。2.緩慢將細(xì)胞工廠測立，有加液口的一側(cè)背向自己，靜置使細(xì)胞懸液緩慢均勻流入各層中。3.側(cè)向旋轉(zhuǎn)90度，保持進(jìn)液口朝上，靜置使細(xì)胞懸液緩慢均勻流入各層中。4.雙手握住進(jìn)液口的一面，緩慢放平，避免液體大幅度晃動。5.移致合適的細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。6.培養(yǎng)結(jié)束后，將培養(yǎng)基倒入收集容器。細(xì)胞培養(yǎng)瓶的性能特點(diǎn)：省時省空間，1個10層細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面積相當(dāng)于36個T-175細(xì)胞培養(yǎng)
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)“花板”怎么解決？2022/09/20
            
					
            
				酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay，ELISA)于1971年分別由瑞典學(xué)者和荷蘭學(xué)者報道，開創(chuàng)了運(yùn)用酶標(biāo)記免疫技術(shù)進(jìn)行液體標(biāo)本中微量物質(zhì)測定的實(shí)驗(yàn)方法。其原理是抗原或抗體的固相化及抗原抗體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。該實(shí)驗(yàn)因其靈敏度較高，特異性較好，操作較簡單，可大批量操作而廣泛應(yīng)用于多種傳染性疾病的篩查工作中。然而，“花板"現(xiàn)象的出現(xiàn)，往往會給實(shí)驗(yàn)者判讀結(jié)果帶來
					
            
				
            
								
            
					
            溶液的顏色與澄清度如何比對2022/09/16
            
					
            
				溶液顏色顏色是通過眼、腦和我們的生活經(jīng)驗(yàn)所產(chǎn)生的一種對光的視覺效應(yīng)。人對顏色的感覺不僅僅由光的物理性質(zhì)所決定，比如人類對顏色的感覺往往受到周圍顏色的影響。有時人們也將物質(zhì)產(chǎn)生不同顏色的物理特性直接稱為顏色。濁度是指溶液對光線通過時所產(chǎn)生的阻礙程度，它包括懸浮物對光的散射和溶質(zhì)分子對光的吸收。水的濁度不僅與水中懸浮物質(zhì)的含量有關(guān)，而且與它們的大小、形狀及折射系數(shù)等有關(guān)。個人的理解是濁度是顏色的一種特殊表現(xiàn)形式。顏色：定性分析,檢測場景應(yīng)在均勻的自然光下，標(biāo)準(zhǔn)的白平衡為背景，（標(biāo)準(zhǔn)白平衡背景的面積應(yīng)
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA競爭檢測法原理介紹2022/09/14
            
					
            
				競爭法一般分為直接競爭法和間接競爭法，這里我們以直接競爭法為例進(jìn)行原理講解。直接競爭法，其基本原理是：將合適濃度的包被抗體包被于微孔板中，加入無關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn)，加入標(biāo)準(zhǔn)品（樣本）和生物素標(biāo)記的抗原物質(zhì)進(jìn)行競爭結(jié)合，經(jīng)合適的溫度和一定時間的孵育，洗滌后，加入HRP標(biāo)記的鏈霉親和素進(jìn)行反應(yīng)，TMB顯色，微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈負(fù)相關(guān)。該方法一般用來檢測具有較少表位的小分子物質(zhì)，當(dāng)然，這種方法也可以用來檢測大分子抗原物質(zhì)甚至是抗體。檢測大分子抗原物質(zhì)時，由于空間位阻的影響，使得該檢
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA載體的形狀主要有三種2022/09/13
            
					
            
				固相載體在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器，不參與化學(xué)反應(yīng)?？勺鱁LISA中載體的材料很多，*常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性，加之它的價格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。ELISA載體的形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板最為常用，專用于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板，上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)菌培養(yǎng)的相關(guān)知識2022/09/08
            
					
            
				細(xì)菌培養(yǎng)是一種用人工方法使細(xì)菌生長繁殖的技術(shù)。細(xì)菌在自然界中分布極廣，數(shù)量大，種類多，它可以造福人類，也可以成為致病的原因。大多數(shù)細(xì)菌可用人工方法培養(yǎng)，即將其接種于培養(yǎng)基上，使其生長繁殖。培養(yǎng)出來的細(xì)菌用于研究、鑒定和應(yīng)用。細(xì)菌培養(yǎng)是一個復(fù)雜的技術(shù)。一、培養(yǎng)條件編輯培養(yǎng)時應(yīng)根據(jù)細(xì)菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基，制定培養(yǎng)條件（溫度、pH值、時間，對氧的需求與否等）。一般操作步驟為先將標(biāo)本接種于固體培養(yǎng)基上，做分離培養(yǎng)。再進(jìn)一步對所得單個菌落進(jìn)行形態(tài)、生化及血清學(xué)反應(yīng)鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、蛋白
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞因子的作用你知道嗎？2022/09/07
            
					
            
				細(xì)胞因子（CK）是由活化免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞（如某些基質(zhì)細(xì)胞）合成分泌的能調(diào)節(jié)細(xì)胞生理功能、參與免疫應(yīng)答和介導(dǎo)炎癥反應(yīng)等多種生物學(xué)效應(yīng)的小分子多肽或糖蛋白，是不同于免疫球蛋白和補(bǔ)體的又一類免疫分子。根據(jù)來源最初將活化淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子稱為淋巴因子（LK），將單核-吞噬細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子稱為單核因子（MK）。目前根據(jù)功能，細(xì)胞因子大致分為以下六類：白細(xì)胞介素；干擾素（IFN）；腫瘤壞死因子（TNF）；集落刺激因子（CSF）；生長因子和趨化因子。細(xì)胞因子生物學(xué)功能1.介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答2.參與炎
					
            
				
            
								
            
					
            牛血清白蛋白(BSA)在實(shí)驗(yàn)中的用處！2022/09/05
            
					
            
				牛血清白蛋白（BSA），是牛血清中的一種球蛋白，包含607個氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用。主要成分蛋白質(zhì)——是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白，球蛋白。多肽——血小板促生長因子能促細(xì)胞分裂，是多肽家庭的主要成員之一，是主要的促細(xì)胞增殖因子；成纖維細(xì)胞生長因子、表皮細(xì)胞生長因子、神經(jīng)細(xì)胞生長因子等，血清中含量雖很少，但對細(xì)胞生長也有一定作用。激素——胰島素：促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸，與
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑膠蟲污染怎么辦？2022/09/01
            
					
            
				“黑膠蟲”可寄生于動物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代?？梢姟昂谀z蟲”是一種異養(yǎng)生物。我們在細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑膠蟲后污染怎么辦？下面有幾個處理建議，我們一起來了解下吧！1．換好一點(diǎn)的血清，這樣可以有效減少“小黑點(diǎn)”的形成。一般的血清都不要去滅活處理，為什么呢？因?yàn)榻?jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱滅活
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)遇到培養(yǎng)液渾濁是什么原因？2022/08/31
            
					
            
				細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染.他們在細(xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細(xì)胞生長影響明顯.2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁,原體感染,國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中最常見的微生物之一.而且它不能用過濾的辦法除去.支原體感染細(xì)胞以后,細(xì)胞病變不很明顯,只是慢慢si
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞污染有哪些常見的原因你知道嗎？2022/08/29
            
					
            
				細(xì)胞污染的常見原因細(xì)菌細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。真菌一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清，慢慢的會長出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不像細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。支原體黑色的，培養(yǎng)液一般會渾濁。國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它
					
            
				
            
								
            
					
            血清融化后有沉淀會影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎？2022/08/26
            
					
            
				血清沉淀主要是纖維蛋白等蛋白、磷酸鹽、脂類等經(jīng)凍融后析出，導(dǎo)致血清內(nèi)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，該現(xiàn)象與血清品質(zhì)無關(guān)。大部分品牌的血清都會有這種情況，不會影響細(xì)胞培養(yǎng)，只是培養(yǎng)時可能偶爾觀察到血清沉淀，注意區(qū)分血清沉淀和細(xì)胞污染即可。血清沉淀較多時可以將血清靜置后，盡量吸走上清，下部有大量沉淀的血清可以2000rpm離心5min后取上清與之前取的上清混合使用。血清反復(fù)凍融、高溫融化、融化不均、滅活等因素均有可能導(dǎo)致沉淀增多，血清融化時應(yīng)盡量在4℃融化，每隔一段時間搖晃一下。
					
            
				
            
							
				
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