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            蛋白質(zhì)樣品中蛋白類雜質(zhì)的檢測方法2022/07/19
            
					
            
				本文圍繞蛋白質(zhì)純度的重要性，闡述了蛋白類雜質(zhì)的檢測方法，包括電泳法，色譜法，沉降速率測定法，質(zhì)譜法，光散射法。任何方法都不能直接定量蛋白質(zhì)樣品的純度。無論最終目的是為了解釋分析數(shù)據(jù)、驗(yàn)證過程質(zhì)量，還是為了確保生物制劑產(chǎn)品的安全性，樣品純度的測定都是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。隨著蛋白類生物制品的發(fā)展，蛋白質(zhì)純度已經(jīng)成為藥品管理的重大問題。在生物制品的質(zhì)量指導(dǎo)原則中指出：除了評價原料藥和藥物產(chǎn)品的純度，可能由預(yù)期產(chǎn)品和多種產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)組成之外，還應(yīng)評價可能出現(xiàn)的雜質(zhì)成份。這些雜質(zhì)可能是在生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的或者是
					
            
				
            
								
            
					
            血清儲存的小常識2022/07/18
            
					
            
				Q1：血清儲存條件是什么？血清在生產(chǎn)后，運(yùn)送至市場上銷售，整個過程中，儲存溫度應(yīng)嚴(yán)格保證在-20℃，避免反復(fù)凍融影響血清活性。因此，實(shí)驗(yàn)人員在收到血清，檢查完好后，及時將血清送至-20℃冰箱中儲存，用時再取出采用三步法解凍。第一次解凍后，將血清分裝，儲存在-20℃冰箱中，盡可能減少血清凍融次數(shù)。解凍好的血清也應(yīng)及時配制成培養(yǎng)基，盡快用完。Q2：血清解凍后可在4℃冰箱中放多久？一般來說，解凍了的血清，無論是否配制成培養(yǎng)基，都不建議在4℃冰箱中久放。血清本身是沒有外源抗菌成分添加的，4℃冰箱使用頻率
					
            
				
            
								
            
					
            試驗(yàn)中培養(yǎng)基的融化方法2022/07/15
            
					
            
				將培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法使之融化。經(jīng)過高壓的培養(yǎng)基應(yīng)盡量減少重新加熱時間，融化后避免過度加熱。融化后應(yīng)短暫置于室溫中以避免玻璃瓶破碎。融化后的培養(yǎng)基放入47℃～50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫，直至使用。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時間一般不應(yīng)超過4h。未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培養(yǎng)基尤應(yīng)注意，融化后保溫時間應(yīng)盡量縮短，如有特定要求可參考的標(biāo)準(zhǔn)。傾注到樣品中的培養(yǎng)基溫度應(yīng)控制在約45℃左右。一般產(chǎn)品在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此一般情況必須防潮、
					
            
				
            
								
            
					
            蛋白質(zhì)的表達(dá)、分離、純化實(shí)驗(yàn)2022/07/13
            
					
            
				基因重組—層析法實(shí)驗(yàn)方法原理攜帶有目標(biāo)蛋白基因的質(zhì)粒在大腸桿菌BL21中，在37℃，IPTG誘導(dǎo)下，超量表達(dá)攜帶有6個連續(xù)組氨酸殘基的重組氯霉素?；D(zhuǎn)移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共價偶連的次氨基三乙酸（NTA）使鎳離子（Ni2+）固相化的層析介質(zhì)加以提純，實(shí)為金屬熬合親和層析（MCAC）。蛋白質(zhì)的純化程度可通過聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)材料大腸桿菌BL21試劑、試劑盒LB液體培養(yǎng)基氨芐青霉素WashingBufferElutionBufferIPTG蒸餾水胰蛋白胨酵母粉氯化鈉儀器、耗材搖床
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)菌培養(yǎng)鑒定操作規(guī)程2022/07/12
            
					
            
				1.檢驗(yàn)?zāi)康淖黾膊〉牟≡瓕W(xué)診斷，查找于疾病有關(guān)的病原菌以及了解與疾病的關(guān)系，指導(dǎo)臨床治療及預(yù)后和流行病學(xué)的調(diào)查。2.原理人體很多部位與外界相通，存在棲息菌群，但不致病，當(dāng)菌群失調(diào)或分離到致病菌則具有臨床意義；另外機(jī)體某些部位是無菌的，如檢出則視為致病菌。并排除采樣及操作污染。3.標(biāo)本要求（1）標(biāo)本類型：，骨髓，腦脊液，胸水，腹水，尿液，等；痰液，前列腺液，膿液，組織分泌物或穿刺液等。（2）標(biāo)本采集：見標(biāo)本采集手冊（3）標(biāo)本儲存和運(yùn)輸：室溫放置，室溫運(yùn)輸并立即送檢。人泌尿生殖道標(biāo)本如白帶前列腺液等
					
            
				
            
								
            
					
            培養(yǎng)細(xì)胞需要注意什么？2022/07/11
            
					
            
				1、選擇正確的培養(yǎng)基在養(yǎng)細(xì)胞之，就要了解，你所養(yǎng)細(xì)胞的來源以及種類和名稱，查閱一定量的文獻(xiàn)，確定所需培養(yǎng)液種類以及是否需要添加特殊成分，常用的細(xì)胞培養(yǎng)液有DMEM、RPMI1640、F12等等，一些常見的細(xì)胞基本可以使用這幾種培養(yǎng)基中的一種來培養(yǎng)，有的需要加入一定其他成分，這需要根據(jù)不同的細(xì)胞類型，查ATCC細(xì)胞庫或者查文獻(xiàn)，才能找到所需合適培養(yǎng)液。選擇正確的培養(yǎng)液是養(yǎng)好細(xì)胞的步。2、了解細(xì)胞的生長習(xí)性不同的細(xì)胞生長習(xí)性不同。如成纖維細(xì)胞是貼壁生長，有一定的密度依賴性，密度小可能會出現(xiàn)不增殖，狀
					
            
				
            
								
            
					
            菌株和菌種的區(qū)別你知道嗎？2022/07/08
            
					
            
				菌種是指用于發(fā)酵過程中作為活細(xì)胞催化劑的微生物，其中包括細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類。菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本材料，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，診斷制品的制備，菌苗的生產(chǎn)、微生物致病性研究、藥物的抑菌試驗(yàn)、藥品微生物檢驗(yàn)等方面都有一套完整的菌種，菌種又分為母種、原種以及栽培種三級。菌株和菌種的區(qū)別1、菌株：菌株是一種菌類系列中一個品種，又叫品系，表示同種微生物不同來源的純種培養(yǎng)，從自然界中分離得到的每一個微生物純培養(yǎng)都可稱一個菌株。2、菌種：菌種則是用于繁殖的種子，是指食用菌、工業(yè)菌、農(nóng)用菌
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA試劑盒的應(yīng)用和類型2022/07/07
            
					
            
				一、ELISA是什么？ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)的簡稱。它是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù)。ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（captureAb）固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體（primarydetectionAb），形成一個抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶
					
            
				
            
								
            
					
            科研用細(xì)胞系鑒定的6大要求2022/07/06
            
					
            
				一種新細(xì)胞系，不論是從原代培養(yǎng)衍生或是從已有的細(xì)胞系衍生，很難估計(jì)它未來的價值。通常要經(jīng)過一段時間的應(yīng)用、傳播以后，該細(xì)胞系真正的重要性才體現(xiàn)出來。這時，需要有關(guān)其起源的詳細(xì)信息，然而已經(jīng)為時太晚，無法回顧性的收集信息。因此，從組織分離或得到一種新的細(xì)胞系開始，充分記錄有關(guān)細(xì)胞系的起源和處理的詳細(xì)資料，是至關(guān)重要的。這些記錄形成該細(xì)胞系的“身世”，記錄越詳細(xì)，價值越大。隨著細(xì)胞系通過細(xì)胞庫和私人聯(lián)系廣泛傳播到已遠(yuǎn)離其起源的各研究室及商業(yè)公司，細(xì)胞培養(yǎng)工作中細(xì)胞系起源方面的問題也變得尤其重要，特別
					
            
				
            
								
            
					
            人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC) 的培養(yǎng)方法2022/07/05
            
					
            
				人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)是從臍帶靜脈中分離出來的原代細(xì)胞。這種細(xì)胞是研究內(nèi)皮細(xì)胞的模型系統(tǒng)，研究相關(guān)的低氧、炎癥、氧化應(yīng)激、感染反應(yīng)以及正常和腫瘤相關(guān)血管生成等應(yīng)用。TNF-α和IFN-γ等細(xì)胞因子會誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞激活（一種炎性反應(yīng)），并導(dǎo)致VCAM-1/CD106等細(xì)胞黏附分子上調(diào)，這些上調(diào)可使用熒光標(biāo)記抗體和細(xì)胞成像進(jìn)行定量，以下是人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）培養(yǎng)操作方法。一、實(shí)驗(yàn)方法原理本實(shí)驗(yàn)采用新鮮的健康產(chǎn)婦新生兒臍帶，采用膠原酶Ⅰ型用消化分離得到臍靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞。膠原酶是理想的
					
            
				
            
								
            
					
            如何正確提取胎牛血清白蛋白？2022/07/04
            
					
            
				胎牛血清白蛋白（BSA），又稱第五組分，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，例如在westernblot中作為Blockingagent;在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋白，一般獲取胎牛血清白蛋白，常常運(yùn)用的方法是加熱法。下面一起來看
					
            
				
            
								
            
					
            支原體的相關(guān)知識您了解嗎？2022/06/30
            
					
            
				支原體早發(fā)現(xiàn)于1898年，1956年Robinson等從細(xì)胞培養(yǎng)物中分離出支原體，之后國內(nèi)外關(guān)于支原體污染細(xì)胞的報道屢見不鮮。它廣泛存在于自然界中，有80余種，污染細(xì)胞常見的支原體包括發(fā)酵支原體（M.fementans）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）、口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginina）、梨支原體（M.pirum）、唾液支原體（M.salivarium）和人型支原體（M.hominis）。支原體通常附著在細(xì)胞的表面，并影響其宿主細(xì)胞的生理、遺傳等多方面的正常
					
            
				
            
								
            
					
            怎么測定培養(yǎng)基的pH值才更準(zhǔn)確？2022/06/29
            
					
            
				校準(zhǔn)首/先在測量pH值時，我們都會對pH計(jì)進(jìn)行一個校準(zhǔn)工作，它的校準(zhǔn)準(zhǔn)確率對后續(xù)的測量有很大影響。pH電極需要有規(guī)律的進(jìn)行校準(zhǔn)。每天至少校準(zhǔn)一次，是最恰當(dāng)?shù)?。由于每支電極都有其特征性的零點(diǎn)和斜率，為了得到可靠和精確的結(jié)果，最少兩點(diǎn)校準(zhǔn)是bi不可少的。當(dāng)要測量大范圍的pH值時，則需要進(jìn)行至少3點(diǎn)校準(zhǔn)。大多數(shù)的pH儀表可以進(jìn)行3-5點(diǎn)校準(zhǔn)。同時所測量的樣品pH值落在所選擇標(biāo)準(zhǔn)液范圍之內(nèi)也是非常重要的。在電極進(jìn)行校準(zhǔn)時，最好等待緩沖液溫度在標(biāo)示溫度下校準(zhǔn)，這樣測出的pH值才是緩沖液標(biāo)示的值，比如pH6
					
            
				
            
								
            
					
            碰到血清沉淀怎么辦？2022/06/28
            
					
            
				血清沉淀是什么？血清中經(jīng)常會出現(xiàn)肉眼可見的沉淀，其成分有多種類型，產(chǎn)生的原因有很多，主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。1.纖維蛋白（Fibrin）血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾（3次0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成,此時血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后,血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀。2.磷酸鈣（CalciumPhosphate）這是一種常見的沉淀成分，通常會造成血清出現(xiàn)云霧狀
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞生長緩慢的兩大根本原因2022/06/27
            
					
            
				一、培養(yǎng)體系出現(xiàn)問題1.檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。（1）如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素，細(xì)胞污染則是不可避免的。①用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查。②如果細(xì)胞被污染則要棄掉。（2）由于支原體污染不容易覺察到，因此必須定期檢測。（3）檢測可能污染的途徑和原因。2.檢查你用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清（例如：是否批次不同或廠商不同）。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10×儲存液，而現(xiàn)在購買的培養(yǎng)基更換為1×液體，而隨后證明問題就出自于此。3.如果問題與培養(yǎng)基無關(guān)，那么很可能還是細(xì)胞的問題。（1）復(fù)蘇另一支凍存的細(xì)胞，并且
					
            
				
            
								
            
					
            巨噬細(xì)胞在病毒感染后的作用研究2022/06/24
            
					
            
				冠狀病毒(CoV)是自然界廣泛存在的一類病毒，因該病毒的形態(tài)在電鏡下觀察類似王冠而得名。其基因總長約28~32kb，基因組大致可分成6到7個區(qū)域，每個區(qū)域均包含至少1條開放閱讀框(opten-readingframe，ORF)。CoV顆粒的直徑約60～200nm，平均直徑為100nm，呈球形或橢圓形，是目前發(fā)現(xiàn)最大的RNA類病毒。目前為止發(fā)現(xiàn)冠狀病毒僅感染脊椎動物，可引起人和動物呼吸道、消化道、泌尿生殖系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)疾病。2019新型guan狀病毒(COVID、19)是新發(fā)現(xiàn)的可以感染人和動物的
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)時需要注意哪些細(xì)節(jié)？2022/06/22
            
					
            
				1.細(xì)胞生長的營養(yǎng)來源不同的細(xì)胞的培養(yǎng)基是不相同的，對于大多數(shù)腫瘤細(xì)胞來說，營養(yǎng)配方一般為：90%合成培養(yǎng)基（DMEM、RPMI1640、MEM等）和10%胎牛血清(FBS)；為了防止污染，可以適時加1%雙抗，抗生素的使用應(yīng)為短期。Q：細(xì)胞培養(yǎng)基配方如何選擇？A:一般購買細(xì)胞時，針對不同的細(xì)胞株，會有詳細(xì)的介紹，包括生長的狀態(tài)圖、培養(yǎng)基的類型等。如人源肺癌細(xì)胞A549可用DMEM培養(yǎng)基，在胎牛血清的選擇上也可以選用品牌、來源可靠的胎牛血清，能提供較好的營養(yǎng)成分，以滿足細(xì)胞株生長的需要。Q：如果細(xì)
					
            
				
            
								
            
					
            胰酶的使用注意事項(xiàng)及配制方法2022/06/21
            
					
            
				胰酶使用注意：1、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。2、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差。胰酶配制方法：1、培養(yǎng)液配制，方便好用，對細(xì)胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制，要先調(diào)ph值7.2到7.4（①胰酶（1：250）2.5克②EDTA-Na0.3克③NaCl8.0克④KCl0.4克⑤Glucose1.0克⑥PhenolRed0.005克⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時，調(diào)pH7.8-8.0，過濾
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞凍存液的原理及配制方法2022/06/20
            
					
            
				細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中，及時凍存原始細(xì)胞是十分
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)操作步驟，你了解嗎？2022/06/17
            
					
            
				細(xì)胞復(fù)蘇的原則：慢凍速融，必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。復(fù)蘇步驟一.實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：將水浴鍋預(yù)熱至37℃。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)消毒，用75％酒精擦拭并且使用紫外線照射40min的超凈工作臺臺面。在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等。二．取出凍存管：根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時核對管外的編號。三．迅速解凍：迅速將凍存管投入到
					
            
				
            
							
				
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