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細胞培養(yǎng)前的滅菌處理技術(shù)2024/04/30

無論從事何種細胞培養(yǎng)，無菌技術(shù)都是絕對最重要的部分。細胞培養(yǎng)前的無菌處理技術(shù)分為三部分即：①工作環(huán)境及表面的處理；②細胞培養(yǎng)所用玻璃及塑料制品的處理；③實驗者的操作技術(shù)；還有哺乳動物細胞的處理及維持細胞生長所需要的培養(yǎng)液的無菌處理。1.工作環(huán)境的無菌處理在細胞培養(yǎng)早期，研究者可以依靠操作技術(shù)和盡可能地靠近火焰以達到細胞的無菌化，隨著工作環(huán)境的機械學發(fā)展，其無菌化程度已得到大大提高，免去了實驗者手指被燒灼的痛苦。層流超凈臺是使工作臺無菌化有效的手段，組織培養(yǎng)可在相對密閉而幾乎無對工作面外界氣流干擾

懸浮細胞的電融合轉(zhuǎn)染技術(shù)簡介2024/04/29

懸浮細胞的電融合轉(zhuǎn)染技術(shù)融合懸浮細胞的步驟與電穿孔的很類似，只是在進行高強度的電場脈沖前后，必須用低幅、高頻電場使細胞排成一條鏈。1用融合介質(zhì)（FM）洗懸浮細胞兩次，然后懸于FM中。洗滌細胞時，在臺式離心機上1000rpm下離心3分鐘，得到細胞沉淀，棄去上清液將細胞懸于新鮮FM介質(zhì)中。2將懸浮細胞轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的融合室內(nèi)。假如要使兩種不同的細胞彼此融合，轉(zhuǎn)移前要充分混合。3啟動介電電泳場，其振幅通常小于200V/cm，頻率在2MHz以內(nèi)，用顯微鏡檢測細胞是否排成一條鏈，調(diào)節(jié)振幅和頻率以達到最佳效果。

發(fā)酵罐中微生物生長特性及其在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用2024/04/29

微生物是發(fā)酵工業(yè)的靈魂，對微生物控制的發(fā)酵過程進行優(yōu)化，我們要了解發(fā)酵罐中微生物的生長反應(yīng)特性。微生物細胞生長是細胞個體內(nèi)許多化學反應(yīng)的綜合結(jié)果。這些反應(yīng)包括合成提供其它反應(yīng)需要的吉布斯自由能；利用底物合成結(jié)構(gòu)單元，再聚合成大分子物質(zhì)，供合成細胞所需等。正常情況下，微生物細胞為了確保有序和高效生長，必須將這些反應(yīng)有機地結(jié)合在一起，經(jīng)濟地分配胞內(nèi)各代謝途徑的通量。大腸桿菌是發(fā)酵研究中用得最多的微生物。在大腸桿菌生長過程中前人已觀察到下列現(xiàn)象∶(1)在大腸桿菌快速生長期間，生物合成的中間體很少滲漏到

懸浮細胞電穿孔轉(zhuǎn)染法的實驗流程詳解2024/04/29

[實驗原理]當細胞置于非常高的電場中，細胞膜就變得具有通透性，能讓外界的分子擴散進細胞內(nèi)，這一現(xiàn)象稱為電穿孔。運用這一技術(shù)，許多物質(zhì)，包括DNA、RNA、蛋白質(zhì)、藥物、抗體和熒光探針都能載入細胞。作為一種基因轉(zhuǎn)導方法，電穿孔已被廣泛用于各種細胞類型，包括細菌、酵母、植物和動物細胞；而且，它還能作為注射方法（稱為電注射），把各種外源物質(zhì)引入活細胞。與其他常用的導入外源物質(zhì)的方法相比，電穿孔具有很多優(yōu)點。一.不必象顯微鏡那樣使用玻璃針，不需要技術(shù)培訓和昂貴的設(shè)備，可以一次對成百萬的細胞進行注射。二.

內(nèi)毒素去除方法有哪些2024/04/29

內(nèi)毒素去除方法概述內(nèi)毒素是存在于革蘭氏陰性細菌外膜中的致病因子，具有較好的耐熱性和穩(wěn)定性，對人體健康有著不可忽視的危害。本文將概述內(nèi)毒素的成分和特性，并討論了目前常見的內(nèi)毒素去除方法包括超濾去除法、活性炭法、表面活性劑萃取、強酸強堿、層析法等。同時還分析了各種方法的優(yōu)缺點以及在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用前景。一、超濾去除法和活性炭法內(nèi)毒素由多糖O抗原、核心多糖和類脂A等組成，作為細菌外膜的主要結(jié)構(gòu)成分，不易被化學藥品破壞。為了有效去除內(nèi)毒素，可以采用多種方法。超濾去除法通過使用孔徑適當?shù)哪とコ鄬Ψ肿淤|(zhì)量

細胞轉(zhuǎn)染方法之-磷酸鈣沉淀法2024/04/29

【實驗原理】磷酸鈣沉淀法是基于磷酸鈣-DNA復合物的一種將DNA導入真核細胞的轉(zhuǎn)染方法。磷酸鈣有利于促進外源DNA與靶細胞表面的結(jié)合。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲作用進入靶細胞，被轉(zhuǎn)染的DNA可以在細胞內(nèi)進行瞬時表達，也可整合到靶細胞的染色體上從而產(chǎn)生不同基因型和表型的穩(wěn)定克隆。該方法可廣泛用于轉(zhuǎn)染許多不同類型的細胞。細胞轉(zhuǎn)染試劑【儀器、材料和試劑】（一）儀器、用具CO2培養(yǎng)箱[1]、10cm細胞培養(yǎng)平板、巴斯德吸管、微量移液器[2]、15ml錐形管、燒杯、量筒等。（二）材料呈指數(shù)

CRISPR/Cas9在微藻研究領(lǐng)域的研究和應(yīng)用2024/04/28

CRISPR/Cas（ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats/CRISPR-associatedprotein）系統(tǒng)是當前先進的基因編輯技術(shù)之一。該技術(shù)因其高效、精確和相對容易操作的特點，在生物醫(yī)學、農(nóng)業(yè)、生物技術(shù)等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用。CRISPR/Cas系統(tǒng)主要包含兩個部分：一個能夠識別目標DNA序列的導向RNA（gRNA）和一個能夠切割DNA的Cas蛋白。通過設(shè)計特定的gRNA來引導Cas蛋白到特定的DNA位點進行切割，從而

從干細胞到心肌細胞：革命性懸浮培養(yǎng)技術(shù)的崛起2024/04/28

隨著干細胞技術(shù)的發(fā)展，將干細胞轉(zhuǎn)化為心肌細胞，并將其用于修復受損的心臟組織。近期，一項懸浮培養(yǎng)技術(shù)的突破為這一目標帶來了新的希望。本文將介紹這一革命性技術(shù)的原理、應(yīng)用和生物醫(yī)學研究的潛在影響。hPSC干細胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)的原理：傳統(tǒng)上，將人類胚胎干細胞（hPSC）轉(zhuǎn)化為心肌細胞（CM）是一個復雜的過程，需要精密的生物技術(shù)知識和復雜的培養(yǎng)條件。然而，最新的研究表明，一種名為懸浮培養(yǎng)技術(shù)的方法正在改變這一局面。這項技術(shù)利用簡單的旋轉(zhuǎn)燒瓶平臺，使廣泛的用戶能夠在不需要過多生物技術(shù)知識的情況下，高效地生成

探索藻類氫化酶：使用藻類生物反應(yīng)器光合自養(yǎng)微生物中氫氣代謝的新視角2024/04/28

在自然界中，光合自養(yǎng)微生物如藻類和細菌通過光合作用將水分解為氧氣和電子，進而產(chǎn)生能量和有機物質(zhì)。然而，除了氧氣外，這些微生物還產(chǎn)生了一種令人著迷的氣體：氫氣（H2）。藻類生物反應(yīng)器不僅是研究藻類氫化酶的重要工具，而且是探索光合微生物中H2代謝的理想平臺。通過在這些反應(yīng)器中操作藻類的遺傳工具和重組技術(shù)，科學家們能夠更精確地調(diào)控氫氣的產(chǎn)生，從而提高藻類生物反應(yīng)器的效率和產(chǎn)量。藻類氫化酶的發(fā)現(xiàn)與意義藻類氫化酶是一類關(guān)鍵的酶，能夠?qū)⒐夂袭a(chǎn)生的電子與質(zhì)子結(jié)合，從而生成氫氣。這些酶的研究不僅為我們提供了對光

核酸電泳分析方法比較2024/04/28

凝膠電泳仍然是核酸分離和分析的既定方法。然而，許多使用預制凝膠和標準化試劑的自動化系統(tǒng)現(xiàn)在非常流行。這種方法在有大量樣品或需要高通量分析的情況下特別有用。此外，還開發(fā)了安捷倫生物分析儀等系統(tǒng)，無需制備電泳凝膠。它們采用在包含互連微儲器的小型盒單元上構(gòu)建的微流體電路。將樣品涂在一個區(qū)域，并在計算機控制的電泳下驅(qū)動通過微通道。這些通道通向儲液器，例如允許與其他試劑（例如染料）一起孵育的時間。因此，電泳分離以微米級形式進行。小樣本量減少了樣本和試劑的消耗，并且由計算機控制的裝置允許在很短的時間內(nèi)捕獲數(shù)

蛋白純化標簽選購技巧2024/04/26

體外重組蛋白表達技術(shù)已經(jīng)滲透到生物學的各個領(lǐng)域。目前，體外重組蛋白表達系統(tǒng)主要有四類：原核表達系統(tǒng)、哺乳動物細胞表達、酵母表達系統(tǒng)及昆蟲細胞表達。表達的一般實驗包括載體構(gòu)建-表達鑒定-蛋白純化三大步驟。在構(gòu)建載體階段，除了一些必要的表達元件，還需要考慮的密碼子優(yōu)化和標簽的選擇。選擇合適的標簽不但有利于蛋白的純化，促進蛋白的可溶性，同時也不能影響蛋白的結(jié)構(gòu)功能和下游應(yīng)用。本文詳細介紹了幾種蛋白純化標簽，幫助我們更好的設(shè)計實驗。一，蛋白純化標簽比較蛋白純化標簽二，HIS-Tag（組氨酸標簽）His標

密度梯度離心在骨髓單核細胞分離中的影響2024/04/26

骨髓單核細胞是一類具有重要生物學功能的細胞群，其在免疫調(diào)節(jié)、造血系統(tǒng)和整體免疫防御中發(fā)揮著重要作用。分離和純化骨髓單核細胞對于研究其功能、疾病相關(guān)機制及醫(yī)學研究手段至關(guān)重要。密度梯度離心作為一種常用的細胞分離技術(shù)，被廣泛應(yīng)用于骨髓單核細胞的提取。一、密度梯度離心原理密度梯度離心原理基于不同細胞類型或顆粒在密度不同的梯度液中的沉降速度不同。通過離心過程，細胞會在不同密度梯度處定位，從而實現(xiàn)細胞的有效分離。在骨髓單核細胞分離中，密度梯度離心可有效分離目標細胞群。二、密度梯度離心對骨髓單核細胞產(chǎn)量的影

rainin移液器Pipet-Lite XLS+ 移液器的優(yōu)勢2024/04/25

在科學研究領(lǐng)域，準確地測量和轉(zhuǎn)移液體是重要的。手動移液器是實驗室中的重要工具之一，而rainin移液器Pipet-LiteXLS+移液器作為實驗室進口移液器之選，在性能和舒適性方面突出表現(xiàn)。本文將深入探討這款移液器的特點、優(yōu)勢以及在科研實驗中的應(yīng)用。Pipet-LiteXLS+移液器采用工程力學技術(shù)和創(chuàng)新設(shè)計，提供高度可重復性的結(jié)果。其彈性密封件和聚合物吸頭退出器與瑞寧的LTS™輕觸去吸頭系統(tǒng)相結(jié)合，實現(xiàn)了平滑的控制，使操作更為順暢。舒適手柄、輕質(zhì)彈簧和“磁性輔助™”技術(shù)，不僅保證了操作的輕松性

PCR實驗室一般需要哪些實驗室儀器設(shè)備2024/04/25

PCR實驗室，即聚合酶鏈式反應(yīng)實驗室，是進行DNA擴增、克隆、突變分析等分子生物學研究的重要場所。為確保PCR實驗的準確性、可靠性和高效性，以下是一份詳細的PCR實驗室儀器設(shè)備清單，以供參考。一、PCR基礎(chǔ)設(shè)備1.PCR儀：用于DNA片段的擴增，是PCR實驗室的核心設(shè)備。2.離心機：用于樣品分離、沉淀和純化，包括高速離心機、低速離心機和微量離心機等。3.電泳儀：用于DNA片段的分離和檢測，包括水平電泳儀和垂直電泳儀等。4.凝膠成像系統(tǒng)：用于觀察和分析電泳結(jié)果，包括紫外透射儀和凝膠成像儀等。5.恒

新建PCR實驗室儀器設(shè)備管理及質(zhì)量管理體系建設(shè)2024/04/25

新建PCR實驗室所需的儀器設(shè)備主要有：1.PCR儀器：用于進行聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）的儀器，能夠在恒定溫度下反復進行DNA復制。2.實時熒光定量PCR儀：用于進行實時定量PCR，監(jiān)測PCR反應(yīng)過程中的DNA合成情況。3.離心機：用于離心沉淀和分離生物樣品，如DNA、RNA、蛋白質(zhì)等。4.恒溫振蕩器：用于在恒溫條件下混合和反應(yīng)生物樣品。5.紫外-可見分光光度計：用于檢測DNA或蛋白質(zhì)的濃度和純度。6.生物安全柜：用于在無菌條件下進行PCR實驗，保護實驗員不受污染。7.無菌工作臺：提供無菌環(huán)境，用

限制性內(nèi)切酶酶切不全的常見原因及解決方案2024/04/25

在分子生物學實驗中，限制性內(nèi)切酶酶切不完是一種相對常見的問題。本文將深入探討酶切不完的原因及解決方案，幫助讀者更好地理解和應(yīng)對這一實驗中常見的挑戰(zhàn)。一、限制性內(nèi)切酶酶切不完的常見原因1.酶活性問題：-存儲條件不當，如溫度過高或過低，會導致酶活性受損。-酶過期或長時間未更換會使酶活性下降。-反復凍融導致酶活性降低，影響切割效果。2.反應(yīng)條件不合適：-緩沖液pH不適合所用的限制性內(nèi)切酶，影響酶活性。-反應(yīng)溫度不正確，會影響酶的活性。-離子強度或成分不適宜，如Mg2?濃度過高或過低。3.DNA底物問題

實驗室常用的20種限制性內(nèi)切酶2024/04/25

在分子生物學領(lǐng)域，限制性內(nèi)切酶（RestrictionEndonucleases）是一類重要的酶，能夠識別特定的DNA序列并在其特定位置切割雙鏈DNA，從而產(chǎn)生特定的DNA片段。這些酶被廣泛應(yīng)用于DNA重組、基因克隆、PCR等實驗中。以下是20種常用的限制性內(nèi)切酶及其相關(guān)應(yīng)用介紹，以及在實驗中需要注意的事項。1.EcoRI-序列識別：GAATTC-應(yīng)用：常用于DNA片段的定向克隆和DNA連接實驗中。-注意事項：適宜的反應(yīng)緩沖液和適當?shù)臏囟葘Ψ磻?yīng)效果至關(guān)重要。2.HindIII-序列識別：AAGC

細胞培養(yǎng)箱中的真菌污染應(yīng)對措施2024/04/24

細胞培養(yǎng)是生命科學研究中的重要手段，然而在實驗過程中常常受到各種污染因素的干擾，其中真菌污染是常見的問題之一。真菌污染不僅會影響細胞的生長和實驗結(jié)果的可靠性，還可能對實驗室環(huán)境和其他細胞造成潛在威脅。本文主要探討了細胞培養(yǎng)箱在培養(yǎng)細胞過程中中遇到的真菌污染，以酵母菌為例，介紹了其對細胞的影響和污染的特征。針對真菌污染問題，提出了解決方案，并分享了一些常用的消毒劑對真菌的滅菌效果。在面對污染時，要及時果斷地處理和丟棄污染細胞的重要性，以保證細胞培養(yǎng)的質(zhì)量和可靠性。一、細胞培養(yǎng)箱中的真菌污染在細胞培

二氧化碳細胞培養(yǎng)箱消毒方法2024/04/24

二氧化碳細胞培養(yǎng)箱為細胞提供了一個恒定的生長環(huán)境，包括溫度、濕度、二氧化碳濃度等。然而，隨著使用時間的增長，培養(yǎng)箱內(nèi)可能會滋生細菌、病毒和其他微生物，這些微生物的存在會對細胞培養(yǎng)造成嚴重的干擾和污染。因此，定期對二氧化碳細胞培養(yǎng)箱進行消毒是非常重要的。本文將介紹二氧化碳細胞培養(yǎng)箱消毒的步驟和注意事項。一、消毒前的準備在進行二氧化碳細胞培養(yǎng)箱消毒前，需要做好充分的準備工作。首先，要關(guān)閉培養(yǎng)箱，斷開電源，并等待培養(yǎng)箱內(nèi)部溫度降至室溫。其次，需要準備好消毒劑、手套、口罩、防護眼鏡等防護用品，以及清潔布

HEK293細胞系表達蛋白的實驗步驟2024/04/24

HEK293細胞系作為常用的哺乳動物細胞系之一，被廣泛用于表達外源蛋白的研究和生產(chǎn)。本文將詳細介紹在HEK293細胞系中表達蛋白的方法步驟，包括細胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、蛋白表達和純化等關(guān)鍵步驟，并分享實驗中的一些經(jīng)驗和技巧，以幫助讀者更好地利用HEK293細胞系開展蛋白表達研究。一、準備工作在進行HEK293細胞系蛋白表達實驗之前，需要進行準備工作：1.確保培養(yǎng)皿、移液器、移液吸頭、培養(yǎng)基、青霉素，離心管，水浴鍋，CO2培養(yǎng)箱等實驗設(shè)備及實驗耗材和試劑齊全，并進行相關(guān)的滅菌處理。2.HEK293細胞系的