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2023
04-11大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增方法
大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一類具有自我更新、多向分化潛能和免疫調(diào)節(jié)功能的成年干細(xì)胞,被廣泛應(yīng)用于組織再生和干細(xì)胞治療領(lǐng)域。其中,rMSCs由于其易于獲取、操作簡(jiǎn)便和多向分化潛能等優(yōu)點(diǎn),成為了研究的重要對(duì)象。一、大鼠rMSCs的來源1、骨髓:大鼠骨髓中含有豐富的MSCs,可以通過骨髓穿刺或摘除骨頭的方式獲取。2、脂肪:大鼠脂肪組織中也可以分離出一定數(shù)量的MSCs,比較適合于治療軟組織損傷。3、胎盤:在大鼠胚胎發(fā)育過程中,其胎盤中也含有MSCs,可以在胎盤收獲時(shí)進(jìn)行分離。二、大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、2023
04-062023
03-24細(xì)胞學(xué)堂 | 貼壁細(xì)胞6大培養(yǎng)難題原因和解決方法
貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)要貼附于培養(yǎng)(瓶)器皿壁上,細(xì)胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展,然后開始有絲分裂,并很快進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。貼壁細(xì)胞因其培養(yǎng)過程較為繁瑣,所以培養(yǎng)時(shí)更容易出現(xiàn)問題。以下總結(jié)了貼壁細(xì)胞培養(yǎng)中常見的6種問題,并詳細(xì)介紹原因和解決方法,若培養(yǎng)時(shí)遇到這些情況,可參考對(duì)應(yīng)解決方法處理。01傳代后細(xì)胞全部飄起解決方法:檢查所使用的培養(yǎng)基的顏色是否偏紫色(如圖1),檢查瓶蓋是否透氣,不透氣瓶蓋是否被擰松。圖1.培養(yǎng)基顏色偏紫通常培養(yǎng)基偏堿,顏色就會(huì)偏紫,主要是因?yàn)榕囵B(yǎng)基里的酚紅指示劑遇酸變黃、遇堿變紫,培養(yǎng)基2023
03-212023
03-17細(xì)胞學(xué)堂 | 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)異常解決方法
懸浮細(xì)胞大多胞體呈圓形,不貼于支持物上,呈懸浮生長(zhǎng),容易大量繁殖。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)雖比貼壁細(xì)胞少了消化的步驟,但培養(yǎng)起來同樣不易。有碎片、形態(tài)改變、生長(zhǎng)速度慢、細(xì)胞貼壁……每一種異常都牽動(dòng)著我們的心。因此本期細(xì)胞學(xué)堂整理了懸浮細(xì)胞收貨和培養(yǎng)過程中的常見問題,并針對(duì)各個(gè)問題列出解決辦法,帶你逐個(gè)擊破!運(yùn)輸常見問題及處理方法1碎片多處理方法:懸浮細(xì)胞受到運(yùn)輸或者其他因素導(dǎo)致細(xì)胞損傷時(shí),容易產(chǎn)生細(xì)胞碎片,碎片可通過低速離心(800~1000rpm,3min)去除;低速離心同時(shí)也會(huì)丟失細(xì)胞,故細(xì)胞密度低的時(shí)2023
03-17如何培養(yǎng)原代小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞?
小鼠骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種除造血干細(xì)胞以外的、具有多向分化潛能的干細(xì)胞,可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化,因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞。那么它是如何培育的呢?1、材料成年小鼠4只、胎牛血清、L-DMEM、胰蛋白酶、PBS、Percool細(xì)胞分離液、雙抗、8%碳酸氫鈉溶液。2、儀器倒置顯微鏡、CO2恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、生物顯微鏡、低溫高速離心機(jī)、無菌操作臺(tái)、血球計(jì)數(shù)板、6孔培養(yǎng)板。3、方法骨髓收集→Percoll密度梯度離心法分離純化骨髓間充質(zhì)2023
03-14人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于組織工程
人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為一個(gè)研究熱點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于再生醫(yī)學(xué)和組織工程(特別是在骨、心血管和神經(jīng)系統(tǒng)等疾病的領(lǐng)域)。作為細(xì)胞模型被應(yīng)用于增殖、移植和分化研究,以及體外的免疫反應(yīng)的鑒定。這是一種能分化成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的多能干細(xì)胞。其具有強(qiáng)大的增殖能力和免疫調(diào)節(jié)能力,因此被廣泛應(yīng)用于組織工程,細(xì)胞治療和基因治療。人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞取自成人的骨髓,其擁有強(qiáng)大的自我更新能力并具有多向分化潛能。干細(xì)胞(BMSC)分離自骨髓;骨髓是機(jī)體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃2023
03-072023
03-052023
02-16細(xì)胞學(xué)堂 | 脫落的293T細(xì)胞如何恢復(fù)正常
293T[HEK-293T](人胚腎細(xì)胞)是293[HEK-293]細(xì)胞株插入了SV40T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株。該細(xì)胞廣泛應(yīng)用于病毒包裝,因其比較容易轉(zhuǎn)染,也是常用的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株。圖1.293T正常生長(zhǎng)圖片該細(xì)胞因?yàn)橘N壁松散,若購買常溫細(xì)胞,收貨時(shí)有可能大部分細(xì)胞脫離培養(yǎng)瓶壁,顯微鏡下找不到細(xì)胞,只能看到肉眼可見的細(xì)胞團(tuán),是正?,F(xiàn)象(如圖2)。圖2.293T收貨聚團(tuán)(圖由客戶提供,僅供學(xué)習(xí)參考)參照以下方式處理即可恢復(fù)正常:1收到細(xì)胞后請(qǐng)先置于培養(yǎng)箱中穩(wěn)定22023
02-142023
02-03細(xì)胞學(xué)堂 | RAW 264.7誘導(dǎo)極化及鑒定大全
RAW264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)是破骨細(xì)胞、炎癥研究最-常用的體外模型之一,被廣泛用于研究風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)溶解、牙周炎等骨骼疾病。極化方式巨噬細(xì)胞是具有異質(zhì)性的一類免疫細(xì)胞,在體內(nèi)外不同環(huán)境影響下可極化為不同表型參與機(jī)體生理、病理反應(yīng)。從激活方式上分為經(jīng)典激活的巨噬細(xì)胞M1和選擇性激活的巨噬細(xì)胞M2。1M1型分化細(xì)菌和脂多糖(LPS)可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1型分化,產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子,抵抗病原入侵,但也會(huì)造成機(jī)體損傷,在實(shí)驗(yàn)中可采用2.5ng/mLIFN-γ和200ng/2022
12-13文獻(xiàn)解讀 | J Exp Med發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞抑制肝纖維化的作用及機(jī)制
肝炎病毒感染、酒精性或非酒精性脂肪性肝炎和膽道梗阻都會(huì)造成慢性肝損傷,使肝臟發(fā)生病理性的纖維化,進(jìn)而誘發(fā)肝纖維化的發(fā)生,最終導(dǎo)致肝硬化和肝功能衰竭。在肝纖維化進(jìn)程中,活化的肝星狀細(xì)胞在肝臟中沉積是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)。同時(shí),其他研究人員發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞通過直接接觸殺死早期激活或衰老的肝星狀細(xì)胞或誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞凋亡,表現(xiàn)出獨(dú)-特的抗纖維化能力。??前列腺素是由花生四烯酸經(jīng)過環(huán)氧合酶和前列腺素合成酶的連續(xù)反應(yīng)而得到的具有生物活性的脂類,其中前列腺素E2在免疫調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮著雙重作用,這種雙重作用的產(chǎn)生2022
12-062022
11-162022
11-112022
11-03雞卵泡顆粒細(xì)胞生理結(jié)構(gòu)是怎樣的?
雞卵泡顆粒細(xì)胞分離自PMSG誘導(dǎo)后3天的雞卵巢組織,顆粒細(xì)胞是卵巢的主要功能細(xì)胞,其增殖與分化直接影響著卵泡的生長(zhǎng)啟動(dòng)、發(fā)育、排卵、黃體形成以及甾體激素分泌等卵巢功能活動(dòng)。細(xì)胞形狀呈圓形或橢圓形。細(xì)胞采用機(jī)械分離法制備而來,細(xì)胞總量約為5×105個(gè)/瓶,細(xì)胞純度可達(dá)80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。初級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞為單層;次級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞增至復(fù)層;成熟卵泡的顆粒細(xì)胞展開又變?yōu)閱螌印nw粒細(xì)胞的胞核大而圓,著色深,細(xì)胞的游離面有許多細(xì)長(zhǎng)突起伸入放射帶的凹2022
11-022022
10-272022
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