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白介素-7 ELISA KIT
白介素-7 ELISA KIT是科研中常用的檢測工具，用于定量測定生物樣本中的白介素 - 7 含量。白介素 - 7 是由 IL-7 基因編碼的 25kDa 大小的可溶性分泌蛋白，屬于造血因子家族，在淋巴細胞的分化、增殖和存活中發(fā)揮關(guān)鍵作用。該試劑盒能助力相關(guān)疾病機制研究、藥物研發(fā)等工作。
試劑盒組成
酶聯(lián)板：96 孔或 48 孔，已預包被抗 IL-7 抗體，作為反應(yīng)的載體 。
標準品：通常為凍干品，一般有 2 瓶。臨用前需使用標準品稀釋液進行復溶，并稀釋成不同濃度梯度，如 0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL 等，用于繪制標準曲線 。
樣本xi釋液：用于稀釋濃度過高的待測樣本，確保其濃度處于試劑盒的有效檢測范圍內(nèi) 。
酶標抗體：即 HRP 標記的抗 IL-7 抗體，為濃縮液，使用時需按照要求用酶標抗體稀釋液進行稀釋 。
酶標抗體稀釋液：專門用于稀釋酶標抗體 。
底物溶液：如 TMB 底物，可與酶標抗體中的 HRP 發(fā)生反應(yīng)，從而產(chǎn)生顏色變化 。
洗滌液：一般為濃縮液，使用時需按特定比例用蒸餾水或去離子水稀釋，用于洗滌酶聯(lián)板，去除未結(jié)合的物質(zhì)，有效降低背景干擾 。
終止液：多為強酸溶液（如硫酸），用于終止底物的顯色反應(yīng)，使反應(yīng)液顏色穩(wěn)定，便于后續(xù)讀數(shù) 。
封板膜：用于在溫育過程中覆蓋酶聯(lián)板，防止液體蒸發(fā)和外界污染 。
使用說明書：詳細介紹試劑盒的使用方法、注意事項、性能指標等 。
樣本要求
血清：采集血液后，室溫放置 2 小時或 4℃過夜，隨后以 1000×g 離心 20 分鐘，小心吸取上清液備用。采血應(yīng)使用無熱原、無內(nèi)毒素的一次性器材 。
血漿：可用乙二胺四乙酸（EDTA）、肝素等作為抗凝劑。樣本采集后 30 分鐘內(nèi)，在 2 - 8℃下以 1000×g 離心 15 分鐘，取上清 。
細胞培養(yǎng)上清：將細胞培養(yǎng)上清以 1000×g 離心 20 分鐘，去除細胞碎片和雜質(zhì)后，取上清用于檢測 。
組織勻漿：用預冷的磷酸鹽緩沖液（PBS，0.01M，pH = 7.4）沖洗組織，che底去除殘留血液。剪碎組織后，按照約 1:9（w/v）的比例加入 PBS，在冰上充分研磨。再經(jīng) 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清用于檢測 。
樣本采集后若在短期內(nèi)進行檢測，可保存于 4℃；若需長時間保存，需置于 - 20℃或 - 80℃凍存，且要避免反復凍融，溶血樣本一般不適合用于檢測 。
操作流程
準備工作：從冰箱取出試劑盒，提前 30 分鐘使其平衡至室溫。同時，將濃縮洗滌液按要求比例用蒸餾水或去離子水稀釋備用 。
加樣：設(shè)置空白孔、標準品孔和樣本孔。空白孔加入樣本xi釋液，標準品孔加入不同濃度的標準品，樣本孔加入處理好的樣本，每孔加樣量通常為 100μL，輕輕混勻，37℃溫育 90 分鐘 。
洗滌：溫育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液加滿各孔，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干，重復洗滌 5 次，確保che底洗凈未結(jié)合物質(zhì) 。
加酶標抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的酶標抗體工作液，37℃溫育 60 分鐘 。
再次洗滌：重復上述洗滌步驟 。
顯色：每孔加入 90μL 底物溶液，輕輕混勻，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（需根據(jù)實際顯色情況判斷） 。
終止反應(yīng)：每孔加入 50μL 終止液，此時溶液顏色由藍色變?yōu)辄S色 。
讀數(shù)：在加終止液后 15 分鐘內(nèi)，用酶標儀在 450nm 波長處測量各孔的吸光度（OD 值） 。
計算結(jié)果：以標準品濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，繪制標準曲線。根據(jù)樣本的 OD 值從標準曲線中查出對應(yīng)的濃度，若樣本進行了稀釋，需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，從而得到實際濃度 。
性能指標
檢測范圍：不同試劑盒有所差異，常見的檢測范圍為 15.6 - 1000 pg/mL 等區(qū)間，可滿足多種樣本中 IL-7 含量的檢測需求 。
靈敏度：一般可低至 7.8 pg/mL 甚至更低，能夠檢測到樣本中微量的 IL-7 。
特異性：對 IL-7 具有高度特異性，與其他細胞因子等物質(zhì)幾乎無交叉反應(yīng) 。
重復性：板內(nèi)變異系數(shù)一般小于 10%，板間變異系數(shù)小于 15%，保證了檢測結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性 。
