高效液相色譜是屬于易學(xué)難用的儀器，特別講究 “正確使用" 和經(jīng)驗(yàn)。

液相工作者接觸最多的是流動(dòng)相，流動(dòng)相是造成液相色譜各種問(wèn)題的主要源頭。

液相色譜儀最常見(jiàn)的故障一是堵，二是漏。下面就這兩點(diǎn)分別展開(kāi)討論。（注：流動(dòng)相以甲醇為例，色譜柱以C18為例）“堵"的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。

 高效液相色譜“堵"的原因之一：配制流動(dòng)相時(shí)細(xì)菌污染。

堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，最主要原因就是流動(dòng)相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來(lái)源就是細(xì)菌。  

 首先我們要認(rèn)識(shí)到，一般的國(guó)產(chǎn)甲醇其實(shí)不需要額外過(guò)濾處理，直接使用沒(méi)有問(wèn)題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì)，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過(guò)濾頭上排除，真正容易引起問(wèn)題的，是水中的細(xì)菌。新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會(huì)長(zhǎng)菌，而這些細(xì)菌雖然肉眼不可見(jiàn)，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報(bào)廢。

時(shí)間過(guò)久,濾頭黏附細(xì)菌導(dǎo)致泵液不準(zhǔn)

 高效液相色譜解決它的方法很簡(jiǎn)單，就是確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦：

（1）購(gòu)買(mǎi)實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)用純水機(jī)，既方便又可靠，質(zhì)量也放心。缺點(diǎn)就是價(jià)格不菲。

（2） 成箱購(gòu)買(mǎi)市售品牌純凈水，如500ml 一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。

圖片

這里特別指出一個(gè)細(xì)節(jié)：在絕大多數(shù)書(shū)本上，凡談到配制流動(dòng)相都會(huì)談到最后有一個(gè)過(guò)濾的步驟。

高效液相色譜從使用的實(shí)際情況來(lái)看有幾點(diǎn)需要注意: 

（1）流動(dòng)相過(guò)濾實(shí)際操作時(shí)由于不可能做到專(zhuān)瓶專(zhuān)用，容易造成的交叉污染，對(duì)于配比復(fù)雜的流動(dòng)相影響更大。所以用完后一定要沖洗干凈。用前不放心的話(huà)也可以沖洗下。

（2）流動(dòng)相過(guò)濾經(jīng)濟(jì)成本比較高。買(mǎi)一套過(guò)濾裝置要3000多元，且過(guò)濾器是比較容易損壞的設(shè)備。過(guò)濾片成本高，有些進(jìn)口的一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計(jì)算，過(guò)濾片的成本會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。并且在使用過(guò)濾片時(shí)，有些會(huì)造成流動(dòng)相的二次污染，原因在于不合格的過(guò)濾片。

（3）流動(dòng)相過(guò)濾耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)。使用溶劑過(guò)濾器有一個(gè)預(yù)清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過(guò)程，至少也有一個(gè)小時(shí)的時(shí)間。這個(gè)成本也不能忽視。