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            目錄:上海一研生物科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>糖原系列>> 糖原磷酸化酶a(GPa)生化檢測(cè)試劑盒

            糖原磷酸化酶a(GPa)生化檢測(cè)試劑盒
            • 糖原磷酸化酶a(GPa)生化檢測(cè)試劑盒
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            參考價(jià)300-5000/盒
            具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

            參考價(jià):¥300 ~ ¥5000

            具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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            • 經(jīng)銷商 廠商性質(zhì)
            • 上海市 所在地

            更新時(shí)間:2024-11-22 09:47:30瀏覽次數(shù):1098評(píng)價(jià)

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            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100管/96樣 50管/48樣
            貨號(hào) EY-01S1378 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
            主要用途 僅用于科研
            糖原磷酸化酶a(GPa)生化檢測(cè)試劑盒糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開(kāi)α-1,4-糖苷鍵移去糖基,釋放1-磷酸糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和無(wú)活性的糖原磷酸化酶b(GPb)兩種形式。糖原的分解主要在GPa的催化下進(jìn)行。

            商品屬性:

            產(chǎn)品名稱:糖原磷酸化酶aGPa)生化檢測(cè)試劑盒

            規(guī)格:100/96 50/48 

            貨號(hào) : EY-01S1378

            測(cè)試方法:微量法 紫外分光光度法  

            分類:糖原系列

            商品詳情:

            測(cè)定意義:

            糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GPEC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開(kāi)α-1,4-糖苷鍵移去糖基,釋放1-磷酸糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶aGPa)和無(wú)活性的糖原磷酸化酶bGPb)兩種形式。糖原的分解主要在GPa的催化下進(jìn)行。

            測(cè)定原理:

            未添加激活劑時(shí),GPa催化糖原和無(wú)機(jī)磷產(chǎn)生糖殘基生成糖原和1-磷酸糖,磷酸糖變位酶和6-磷酸糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH上升速率,即可反映GPa活性。

            需自備的儀器和用品:

            紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

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            ADH測(cè)定操作:

            1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

            2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

            3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽測(cè)定管=A1-A2。

            測(cè)定步驟:

            1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

            2、將試劑二在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

            3、操作表:

            試劑名稱μL

            測(cè)定孔

            樣本

            20

            試劑二

            760

            試劑三

            10

            試劑四

            10


            將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

            注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

            NAD-MDH活力單位的計(jì)算:

            1、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算

            單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

            NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

            2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:

            (1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

            單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

            NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

            (2)按樣本鮮重計(jì)算:

            單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

            NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

            (3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

            單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

            NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

            V反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬(wàn)。

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