當前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>技術文章>>小白鼠染色體的制備實驗方法和步驟
(一) 轉化細胞秋水仙素處理 取骨髓前3~4小時先給小白鼠經腹腔注入0. 1%的
秋水仙素,注射劑量為4毫克/每公斤動物體重。
(二) 取骨髓 經秋水仙素處理的小白鼠,可用損傷脊髓法處死,然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,用一小塊紗布來回搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關節(jié)頭,然后將股骨剪碎投入小燒杯中,用2毫升1%檸檬酸鈉溶液攪爛碎骨,使骨髓細胞游離出來。靜止片刻,用吸管把懸浮液吸到離心管中,可重復沖洗一次。此時離心管中的細胞懸浮液可達 4~5毫升。
(三) 低滲 將所獲得的轉化細胞懸浮液先進行平衡(注意:每次離心前都要平衡),然后以 1000rpm離心10分鐘,吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加0.075M KCL 溶液至8 毫升刻度,將細胞沉淀物吹散打勻,在水浴37℃ 低滲20~30分鐘。
(四) 固定 低滲處理后的材料,以1000rpm離心10分鐘,吸去上清液,留0.2ml沉淀物,用吸管吹散沉淀物,沿管壁加固定液至6毫升, 沖勻后靜止固定20分鐘,即*次固定。按上述條件離心,去上清液,再次加入固定液至6ml,進行第二次固定。20分鐘后離心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液,沖勻制成細胞懸液。
(五) 滴片 取事先在冰箱中預冷的載玻片(載玻片須經硫酸洗液浸泡10天以上,經清水沖洗,用蒸餾水浸泡),滴2~3滴細胞懸液于粘有冰水的載玻片上,用嘴吹氣,使細胞迅速分散。將載片插放在切片架上晾干。
(六) 染色 取2張制片平放在玻璃板上,用10:1 Giemsa染液染色20分鐘,流水沖洗后晾干即可鏡檢。
(七) 轉化細胞觀察 用中倍鏡選擇分散適度,不重迭的染色體分裂相,轉高倍鏡詳細觀察小白鼠染色體的形態(tài)特征,并計算2n的染色體數目。
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