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            上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第10年

            15026555973

            ATCC細(xì)胞
            蛋白質(zhì)產(chǎn)品
            核酸擴(kuò)增產(chǎn)品
            elisa試劑盒
            生化試劑
            PCR試劑盒
            標(biāo)準(zhǔn)品
            PCR鑒定
            生化試劑盒
            科研細(xì)胞
            分子生物學(xué)試劑
            ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
            蛋白
            抗體

            質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作步驟

            時(shí)間:2017/4/13閱讀:14543
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            1.1 轉(zhuǎn)化細(xì)胞細(xì)胞鋪板:將細(xì)胞按70%的匯合度接種到96孔板。
             
            1.2 轉(zhuǎn)染:16h后轉(zhuǎn)染螢光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒和RNA,每個(gè)樣品設(shè)置6個(gè)復(fù)孔
             
            (1)配制DNA和轉(zhuǎn)染試劑: 96孔板轉(zhuǎn)染質(zhì)粒時(shí)每孔比例為pLenti:Firefly:Renilla:轉(zhuǎn)染試劑=0.2μg:0.1μg:0.01μg:0.25μL
             
            (2)稀釋好DNA及轉(zhuǎn)染試劑,常溫孵育5min
             
            (3)將稀釋好的DNA分別和轉(zhuǎn)染試劑混勻,常溫孵育20min
             
            (4)每孔棄去15μL培養(yǎng)基,將15μL DNA轉(zhuǎn)染混合液添加到每孔細(xì)胞樣品中
             
            (5)轉(zhuǎn)染6h后,換新鮮*培養(yǎng)基
             
            2 轉(zhuǎn)化細(xì)胞雙報(bào)告基因檢測(cè)
             
            (1)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染48h后,棄去培養(yǎng)基,用100μL 1XPBS洗1遍
             
            (2)傾斜96孔板,吸干剩余的PBS
             
            (3)去離子水將5XPLB稀釋成1XPLB,使用前放到常溫
             
            (4)每孔加50μL稀釋好的1X PLB,搖床常溫條件下?lián)u15min,進(jìn)行裂解
             
            (5)白色不透光的96孔酶標(biāo)板中每孔加步驟4的上清液10μL,加入100μL預(yù)先混好的LAR II,2s后測(cè)數(shù)據(jù)
             
            (6)每孔添加100μL預(yù)先混好的Stop&Glo Reagent,靜止2s后,測(cè)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化細(xì)胞

             

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