產(chǎn)品屬性：

名稱(chēng)    5637 (人膀胱癌細(xì)胞) (STR鑒定正確)    

種屬    人類(lèi)     

生長(zhǎng)特性    貼壁細(xì)胞    

細(xì)胞形態(tài)    上皮細(xì)胞樣    

背景描述    5637細(xì)胞能生成SCF、IL-1、IL-3、IL-6、G-CSF、GM-CSF等。    

生物安全等級(jí)    1    

生長(zhǎng)培養(yǎng)基    RPMI-1640(PM150110)＋10% FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)    

推薦傳代比例    1:3-1:4    

推薦換液頻率    2~3次/周    

倍增時(shí)間    ~24-36小時(shí)    

凍存條件    凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮    

培養(yǎng)條件    氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃    

致瘤性    Yes, within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells.    

注意事項(xiàng)    該細(xì)胞較難消化，注意延長(zhǎng)消化時(shí)間，消化到細(xì)胞收縮變圓，輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)邊，細(xì)胞可以滑落方可終止消化。   

保藏機(jī)構(gòu)    ATCC; HTB-9 DSMZ; ACC-35    

冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

豬皰疹病毒(PHV)核酸檢測(cè)試劑盒    48T    

豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?    48T    

豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)核酸檢測(cè)試劑盒    48T    

豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-Ⅰ)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?    48T    

豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-Ⅰ)核酸檢測(cè)試劑盒    48T    

豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?    48T    

豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸檢測(cè)試劑盒    48T    

豬乙型腦炎病毒(JEV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?    48T    

豬乙型腦炎病毒(JEV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)    48T    

豬水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?    48T    

豬水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)    48T    

傳染性胃腸炎病毒(PTGV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?    48T    

傳染性胃腸炎病毒(PTGV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)    48T    

水泡病毒(SVDV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?    48T    

水泡病毒(SVDV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)    48T    

傳染性胸膜肺炎(APP)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?    48T    

傳染性胸膜肺炎(APP)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)    48T    

鉤端螺旋體(Lep)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?    48T    

鉤端螺旋體(Lep)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)    48T    

豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒(PERV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?    48T    

豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒(PERV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)    48T    

腺苷A1A受體抗體    

芳基硫酸酯酶B抗體    

γ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體    

共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體    

腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶    

芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體    

AlkB同源蛋白8抗體    

ABI基因家族成員3結(jié)合蛋白抗體    

游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒    

游離睪酮(F-TESTO)ELISA試劑盒    

游離蛋白S(FP-S)ELISA試劑盒    

游離雌三醇(FE3)ELISA試劑盒    

游離β絨毛膜促性腺激素(f-βhCG)ELISA試劑盒    

幽門(mén)螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒    

幽門(mén)螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA試劑盒    

幽門(mén)螺桿菌細(xì)胞毒素相關(guān)基因蛋白A-IgG(HP-CagA-IgG)ELISA試劑盒    

優(yōu)球蛋白(EL)ELISA試劑盒    

硬骨素(SOST)ELISA試劑盒    

5637 (人膀胱癌細(xì)胞)印度刺猬因子(IHH)ELISA試劑盒    

隱熱蛋白(NLRP3/C1orf7/CIAS1/NALP3/PYPAF1)ELISA試劑盒    

吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)ELISA試劑盒    

音猬因子N端(Shh-N)ELISA試劑盒    

音猬因子(SHH)ELISA試劑盒