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一,細胞潤洗次數(shù)絕大部分細胞用胰酶潤洗一次即可胰酶是一種蛋白酶,酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈,通過在特定位置上降解蛋白,使細胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,從而使兩者分離。這時,細胞由于自身內(nèi)部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。由于在細胞培養(yǎng)中,胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細胞離散。胰酶作用時間過長、作用次數(shù)過多,都容易破壞細胞表面結(jié)構(gòu)。在吸去培養(yǎng)基后,用37℃預熱過的PBS潤洗細胞表面1-2次,隨后加入適量胰酶,以能夠平鋪在器皿底部一層,略蓋過細胞
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細胞因子和炎癥環(huán)境在塑造T細胞活化和分化中起主要作用。在急性感染期間,高度促炎的環(huán)境促進效應T細胞(包括KLRG-1+短壽命效應細胞)發(fā)育,而記憶前體和記憶T細胞在低促炎環(huán)境中發(fā)育。在慢性感染和癌癥期間,高水平促炎細胞因子可以誘導陰性調(diào)節(jié)細胞因子的釋放,這些細胞因子都會促進T細胞耗竭。一,IL-10IL-10是一種STAT-3誘導細胞因子,通常與減弱T細胞活化有關(guān)。IL-10通常在慢性感染和癌癥中誘導產(chǎn)生,阻斷IL-10可以預防和/或逆轉(zhuǎn)T細胞衰竭。多種免疫細胞類型,包括樹突狀細胞(DC)、B細
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逐典全能核酸酶:高效、安全、高比酶活—生物蛋白藥生產(chǎn)的得力助手!
全能核酸酶可以降解所有形式的DNA和RNA,將它們消化成3-8個堿基長度的5-單磷酸寡核苷酸,且不具有堿基識別特異性。在生物技術(shù)和生物制藥領(lǐng)域中扮演著重要的角色,尤其是在生物蛋白藥的生產(chǎn)過程中,科研中常用于在蛋白樣品制備和純化工藝的改善、提高蛋白產(chǎn)量等方面;隨著生物藥的快速發(fā)展和應用,全能核酸酶廣泛應用于去除疫苗樣品、細胞和基因治療病毒樣品及重組蛋白藥物中的核酸污染,降低核酸殘留毒性風險,提高產(chǎn)品安全性。在生物蛋白藥的生產(chǎn)過程中,全能核酸酶主要用于以下幾個方面:1,基因克隆與表達:全能核酸酶被用 -
高濃度的IL-2是提高TME浸潤、逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫抑制的重要炎癥細胞因子。如何在保證IL-2起效的同時降低IL-2的全身毒性是眾多實體瘤免疫療法開發(fā)的重要研究方向。2022年12月加州大學舊金山分校的研究團隊在Science上展示了他們的方案。該臨床前試驗選擇通過在T細胞上搭載合成細胞因子的通路,在體內(nèi)驅(qū)動,使細胞自主產(chǎn)生IL-2,盡可能使IL-2僅在目標腫瘤TME中產(chǎn)生作用,降低全身毒性。局部合成IL-2的機制與效果為了讓IL-2不在全身擴散,自主合成細胞因子回路需要在腫瘤TME的免疫抑制環(huán)境中依
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小動物活體成像技術(shù),是在1999年美國哈佛大學Weisslede提出的一項技術(shù),該技術(shù)是指應用影像學方法,對活體狀態(tài)下的生物過程進行組織、細胞和分子水平的定性和定量研究。傳統(tǒng)的動物實驗需要在多個時間點分批處死動物以獲取實驗數(shù)據(jù),而小動物活體成像技術(shù)可同時觀測多個實驗動物、對同一研究個體可進行持續(xù)、反復跟蹤成像,避免動物而造成的組間差異,節(jié)省動物成本,被廣泛應用于生命科學研究領(lǐng)域。其中小動物活體光學成像是通過一定方式對小動物進行光學標記,再通過成像技術(shù)及設(shè)備(如RevvityIVIS小動物活體光學
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內(nèi)毒素檢查是注射劑安全性檢查中的重要檢查項目,我們接受過的每一針注射劑都已經(jīng)過內(nèi)毒素污染檢測。隨著生物制藥的發(fā)展,內(nèi)毒素的檢測需求也日益增加,實驗室需要更高效、更精準的檢測方案來應對日益增長的檢測需求。然而,傳統(tǒng)的手動檢測方法存在諸多局限,如操作繁瑣、易出錯、費人工等,這些問題限制了實驗室的效率和檢測通量的提升。Lonza作為擁有幾十年內(nèi)毒素檢測經(jīng)驗的廠家,新近推出一體化端到端內(nèi)毒素自動化檢測方案,不僅僅通過PyroTecPro™內(nèi)毒素自動化工作流程解決測試過程中遇到的問題,還將MODA-EM™
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LizeteCaballero——加州大學舊金山分校血液和骨髓移植(BMT)實驗室高級主管在美國,37°C水浴是解凍細胞治療產(chǎn)品設(shè)備。這種方法需要手動將產(chǎn)品直接浸入溫度控制的水中,按摩袋子,或旋轉(zhuǎn)小瓶,以確保解凍。最重要的是,對于水浴,人們普遍擔心外源性細菌對微生物的污染,這種污染會使本已脆弱的患者進一步患病甚至死亡。LizeteCaballero一直關(guān)注質(zhì)量和創(chuàng)新,他曾在加州大學舊金山分校(UCSF)血液和骨髓移植實驗室擔任高級主管近10年,現(xiàn)在是強生ChimericAntgen受體T細胞(C
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使用Victor NIVO多模式檢測已進行快速Ca2+信號檢測
G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)參與許多細胞信號轉(zhuǎn)導通路。目前,超過45%的藥物都以GPCR為靶點。確定GPCR細胞活性,可以通過監(jiān)測細胞內(nèi)Ca2+濃度的變化來實現(xiàn)。Ca2+直接或間接調(diào)節(jié)包括基因表達、細胞運動和收縮在內(nèi)的許多生理過程。諸如蛋白激酶C(PKC)、轉(zhuǎn)錄因子NFAT或鈣調(diào)磷酸酶等多種蛋白質(zhì)均受Ca2+濃度變化的調(diào)節(jié)。在此,我們介紹了使用VICTOR™Nivo多模式讀板儀以水母發(fā)光蛋白生物發(fā)光檢測方法,分析在GPCR刺激或抑制下的快速胞內(nèi)Ca2+信號。化學發(fā)光法檢測原理是基于GPCR的激活引