圖一、示意圖

材料與方法

可電離脂質(zhì)的設(shè)計(jì)與合成：我們?cè)O(shè)計(jì)并合成了一系列具有不同可降解連接子（如酯鍵、碳酸酯鍵、酰胺鍵和脲鍵）的可電離脂質(zhì)。通過(guò)核磁共振（NMR）和質(zhì)譜技術(shù)對(duì)這些脂質(zhì)進(jìn)行了表征，并評(píng)估了它們?cè)谝掖己退?乙醇混合物中的穩(wěn)定性。

LNP的制備與表征：采用微流控混合裝置制備LNPs，并使用動(dòng)態(tài)光散射（DLS）和zeta電位分析儀對(duì)LNPs的粒徑、多分散指數(shù)（PDI）和zeta電位進(jìn)行了表征。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳評(píng)估了mRNA的封裝效率。

體外與體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率評(píng)估：在HeLa、RAW264.7和HepG2細(xì)胞系中評(píng)估了不同LNPs的體外轉(zhuǎn)染效率。通過(guò)尾靜脈注射LNPs至C57BL/6J小鼠體內(nèi)，并使用生物發(fā)光成像技術(shù)評(píng)估了LNPs在主要器官中的分布和mRNA表達(dá)水平。

安全性評(píng)估：通過(guò)ELISA檢測(cè)了小鼠血漿中細(xì)胞因子（如MCP-1、IL-6、TNF-α和IL-10）的水平，并使用血生化分析儀評(píng)估了肝功能標(biāo)志物（如AST、ALT和ALP）的水平，以評(píng)估LNPs的體內(nèi)安全性。

療效評(píng)估：在轉(zhuǎn)移性肺癌小鼠模型中評(píng)估了負(fù)載偽單胞菌外毒素A（mmPE）mRNA的LNPs的抗腫瘤療效。通過(guò)測(cè)量肺重量、肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)和小鼠生存期來(lái)評(píng)估治療效果。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 可電離脂質(zhì)的穩(wěn)定性和LNP表征：

在評(píng)估了所設(shè)計(jì)的具有不同連接子的可電離脂質(zhì)在乙醇和水/乙醇混合物中的穩(wěn)定性后，我們發(fā)現(xiàn)酰胺（如lipid 34）和脲鍵（如lipid 35）連接子的脂質(zhì)在這兩種溶劑系統(tǒng)中均表現(xiàn)出較高的穩(wěn)定性，未發(fā)生明顯的水解。相比之下，含有酯鍵（如lipid 14）、反向酯鍵（如lipid 32）和碳酸酯鍵（如lipid 33）連接子的脂質(zhì)在水/乙醇混合物中迅速降解。這些結(jié)果表明，酰胺和脲鍵連接子能夠顯著提高可電離脂質(zhì)的化學(xué)穩(wěn)定性，有利于LNPs的長(zhǎng)期儲(chǔ)存和應(yīng)用。

通過(guò)微流體混合裝置制備的LNPs，其粒徑、多分散指數(shù)（PDI）和zeta電位等物理化學(xué)性質(zhì)得到了詳細(xì)的表征。結(jié)果表明，所有LNPs的粒徑均在100 nm左右，PDI均小于0.1，顯示出良好的單分散性。此外，含有酰胺和脲鍵連接子的LNPs具有正zeta電位，而含有酯鍵、反向酯鍵和碳酸酯鍵連接子的LNPs則具有負(fù)zeta電位。所有LNPs的mRNA封裝效率均超過(guò)95%，進(jìn)一步通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)了mRNA的完整封裝和保留。

2.2 體外轉(zhuǎn)染效率：

2.3 體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率與生物分布：

討論

結(jié)論

參考文獻(xiàn)：Somu Naidu, Gonna, et al. "Ionizable Lipids with Optimized Linkers Enable Lung-Specific, Lipid Nanoparticle-Mediated mRNA Delivery for Treatment of Metastatic Lung Tumors." ACS nano (2025).