材料與方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：本研究使用了 FVB/N、BALB/c 和 C57BL/6 品系的小鼠。雌性小鼠與雄性小鼠交配后，次日觀察到陰道栓記為懷孕第 0 天（GD0）。

mRNA-1273 疫苗接種：懷孕小鼠在 GD14 和 GD17 分別接受肌肉注射 mRNA-1273 疫苗，劑量分別為 0.2、1.0、2.0 或 4.0 μg，稀釋于 100 μL 生理鹽水中。

胎兒組織收集：在麻醉下對(duì)懷孕小鼠進(jìn)行中線(xiàn)剖腹術(shù)，暴露子宮，通過(guò)子宮切開(kāi)術(shù)取出胎兒，并立即用生理鹽水洗滌。斷頭后，用吸管收集胎兒血液，并獲取胎兒胎盤(pán)、肝臟和軀干軟組織。

免疫印跡分析：使用抗聚乙二醇（PEG）抗體通過(guò)免疫印跡分析半定量檢測(cè) mRNA-LNP。

RT-PCR：使用 RT-PCR 定量檢測(cè)刺突 mRNA。

ELISA：使用 ELISA 測(cè)定血清中抗刺突免疫球蛋白（Ig）水平、PEG 含量等。

淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和 ELISpot 實(shí)驗(yàn)：通過(guò)淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和 ELISpot 實(shí)驗(yàn)評(píng)估針對(duì)刺突蛋白的細(xì)胞免疫。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 胎盤(pán)穿透性檢測(cè)結(jié)果：

PEG 化的 LNPs 穿透胎盤(pán)的時(shí)間進(jìn)程：在給懷孕 14 天（GD14）的小鼠單次肌肉注射 4 μg mRNA-1273 后，PEG 化的脂質(zhì)納米顆粒（LNPs）迅速進(jìn)入母鼠的血液循環(huán)，并在接種后 30 分鐘內(nèi)就穿過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入了胎兒循環(huán)。PEG 化的 LNPs 在母鼠血液中的濃度在接種后 3-24 小時(shí)內(nèi)逐漸降低，但在胎兒血液中則能夠維持較高的濃度，持續(xù)時(shí)間至少為 7 天，這表明胎兒體內(nèi)對(duì) PEG 的分解速度較慢。

刺突 mRNA 的胎盤(pán)穿透與分布：使用 RT-PCR 技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，刺突 mRNA 在母鼠接種 mRNA-1273 后的 1 小時(shí)內(nèi)即進(jìn)入胎兒血液，但在胎兒循環(huán)中的存在時(shí)間較短，大約在 4-6 小時(shí)后檢測(cè)不到。然而，刺突 mRNA 能夠在胎兒組織中積累，主要積累在胎兒肝臟中，同時(shí)也能在胎兒胎盤(pán)和軀干軟組織中檢測(cè)到。進(jìn)一步的研究表明，刺突 mRNA 在胎兒肝臟和脾臟中的存在時(shí)間至少持續(xù)至出生后 3 周。

PEG 和刺突 mRNA 的劑量依賴(lài)關(guān)系：降低母鼠接種的 mRNA-1273 劑量會(huì)導(dǎo)致胎兒血清中 PEG 水平的下降。例如，與接種 4 μg mRNA-1273 的母鼠相比，接種 0.2 μg mRNA-1273 的母鼠所生的胎兒在接種后 3 小時(shí)內(nèi)血清中的 PEG 水平顯著降低。盡管胎兒胎盤(pán)中的刺突 mRNA 水平在母鼠接種不同劑量（0.2 μg 和 4 μg）的 mRNA-1273 后沒(méi)有顯著差異，但低劑量組母鼠所生的胎兒肝臟中刺突 mRNA 的積累量明顯少于高劑量組。

Figure 1. Transplacental mRNA-1273 transfer after maternal mRNA-1273 vaccination during pregnancy

2.2 免疫反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果：

幼鼠體內(nèi)抗刺突 IgM 水平的檢測(cè)：母鼠接種 mRNA-1273 后，幼鼠體內(nèi)的抗刺突 IgM 抗體水平顯著升高，且高劑量組母鼠所生的幼鼠血清中的 IgM 抗體水平更高。

討論

本研究證實(shí)了小鼠胎盤(pán)對(duì) mRNA-1273 具有穿透性，且 mRNA-1273 在胎兒中具有免疫原性，而非耐受性。這一發(fā)現(xiàn)挑戰(zhàn)了以往認(rèn)為胎盤(pán)是 mRNA-LNP 絕對(duì)屏障的觀點(diǎn)，為重新評(píng)估 mRNA-LNP 的胎盤(pán)穿透能力提供了重要依據(jù)。然而，將小鼠研究結(jié)果外推至人類(lèi)時(shí)需謹(jǐn)慎，因?yàn)槿撕托∈筇ケP(pán)的組織架構(gòu)存在差異。此外，盡管 mRNA-1273 在此次小鼠實(shí)驗(yàn)中未表現(xiàn)出明顯安全問(wèn)題，但疫苗 mRNA 及其產(chǎn)物在體內(nèi)的長(zhǎng)期存在仍引發(fā)了對(duì)潛在基因毒性的擔(dān)憂(yōu)。

結(jié)論

參考文獻(xiàn)：Chen, Jeng-Chang, et al. "mRNA-1273 is placenta-permeable and immunogenic in the fetus." Molecular Therapy Nucleic Acids 36.1 (2025).