NobleRyder M0128 Strep-tag II 蛋白純化磁珠 Magrose Strep-Tactin

Strep-tag II 蛋白純化磁珠-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：M0128

產(chǎn)品名稱：Strep-tag II 蛋白純化磁珠 Magrose Strep-Tactin

產(chǎn)品規(guī)格：5mL

產(chǎn)品簡介：

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder M0128 Strep-tag II 蛋白純化磁珠 Magrose Strep-Tactin是模擬鏈霉親和素-生wu素系統(tǒng)的新型蛋白純化系統(tǒng)，Strep-Tactin 對 Strep-Tag II 的親和能力與鏈霉親和素相比，至少強 10 倍以上，且分離純化條件溫和，在生理條件下即可實現(xiàn)蛋白的分離純化；此外，與其他 tag 相比，Strep-TagII 為 8 個氨ji酸的小標簽（WSHPQFEK），由于標簽小，僅為1kDa左右，不影響融合后蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。這些溫和的純化參數(shù)能保存蛋白質(zhì)的生物活性， 并僅經(jīng)一步提取即可產(chǎn)出超過 99%的純度。

BeadsMagroseStrep-Tactin 磁珠采用特殊的蛋白偶聯(lián)工藝，將 Strep-Tactin 蛋白共價偶聯(lián)到超順磁性磁珠表面，制備了一種專為高效、快速分離純化Strep-tagII 蛋白的一種新型功能化材料，實現(xiàn)并搭建了提取速度、提取量及純度兼得的蛋白純化平臺。

適用范圍：

可用于從任何表達系統(tǒng)，包括桿狀病毒、哺乳動物細胞、酵母和細菌中含有 Strep-TagII 標簽蛋白的分離純化。

操作步驟：

目標蛋白與磁珠的結(jié)合性能將直接影響目標蛋白的純化效率，各種緩沖液配制也將在一定程度上影響目標蛋白的回收率和純度。以下提供一個較為廣泛應(yīng)用的Strep-TagII 蛋白的純化流程，用戶可參考該操作流程，或者根據(jù)自己蛋白的特性自行設(shè)計和優(yōu)化蛋白純化流程。

1、緩沖溶液配制

Binding/Washing Buffer ：10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH：8.0

Elution Buffer：2.5 mM desthiobiotin in Binding Buffer。

2、樣品處理

(1) 大腸桿菌、酵母等細胞內(nèi)表達蛋白：表達細胞用適量 BindingBuffer 稀釋，加入蛋白酶抑制劑（如終濃度為 1mM 的 PMSF）；冰浴超聲裂解細胞，即為粗蛋白樣品。如果樣品過于粘稠，可根據(jù)需要在粗樣品中加入適量核酸酶，在冰上放置 30min，以降解核酸。另外，如果目標蛋白含量較低，建議將粗蛋白樣品進行離心操作。

(2) 胞外表達蛋白：取胞外表達上清，用等量BindingBuffer 稀釋平衡，即為粗蛋白樣品。

(3) 動物細胞胞內(nèi)表達蛋白：取適量動物細胞，用適量 PBS 洗滌 1 次，棄上清；用適量含 1%（v/v） Triton X-100 或 1%（v/v）NP-40 的 Binding Buffer 重懸；加入蛋白酶抑制劑（如終濃度為 1mM 的PMSF）；置于冰上 10min，即為粗蛋白樣品。

3、磁珠預(yù)處理

一般情況下，磁珠的使用量是由用戶根據(jù)目標蛋白產(chǎn)量和磁珠載量信息計算獲得。例如：采用大腸桿菌表達某目標蛋白，250mL 發(fā)酵液收獲 1g 濕重的菌體，通過預(yù)實驗估算其目標蛋白產(chǎn)量為~7mg，用戶需要取 10mL10%的磁珠懸液用于目標蛋白的純化。以下即以此為例進行詳細說明：

(1) 將磁珠產(chǎn)品置于漩渦混勻器上充分混勻，用移液器取 10mL 磁珠懸液于離心管中；

(2) 將離心管置于磁性分離器上，待溶液變澄清后，移去上清液；

(3) 加入 5~10mLBindingBuffer/Washing Buffer 到上述裝有磁珠的離心管中，蓋緊蓋子，漩渦振蕩15 s，使磁珠重新懸浮。將離心管置于磁性分離器上，磁性分離*，移去上清液，重復(fù)洗滌 2 次。

*注：在磁性分離過程中，為了減少磁珠在使用過程中的損耗，待溶液變澄清后，蓋緊離心管蓋子，保持離心管仍在磁性分離器上，手持磁性分離器與離心管上下翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使澄清的溶液涮洗離心管蓋上殘留的磁珠，靜置片刻，使溶液重新變澄清；以下同。

4、目標蛋白與磁珠結(jié)合

(1) 用 10mLBinding Buffer 重懸 1g 濕重的菌體，進行破碎和裂解后，即為粗蛋白樣品；

(2) 將粗蛋白樣品轉(zhuǎn)移到裝有已預(yù)處理磁珠的離心管中，蓋緊離心管蓋；

(3) 將離心管置于漩渦混勻器振蕩 15s，然后將其置于垂直混合儀上，室溫垂直混勻 30min（如果需要，可在 2~8℃的低溫環(huán)境下旋轉(zhuǎn)混合約 1h，防止目標蛋白降解）；

(4) 將離心管置于磁性分離器上進行磁性分離，移出上清液到新的離心管中以備后續(xù)檢測。從磁性分離器上取下離心管進行下一步洗滌步驟。

5、磁珠洗滌

(1) 將步驟 4 的磁珠中加入 5~10mLWashingBuffer，漩渦混合 2min，磁性分離，移出清洗液到新的離心管中，以備取樣檢測；

(2) 繼續(xù)將上述磁珠中加入 5~10mLWashingBuffer，漩渦混合 2min，使磁珠重新懸浮，將磁珠懸液轉(zhuǎn)移至新的離心管，避免原離心管壁上非特異性吸附蛋白污染目標蛋白；磁性分離，移出上清液到收集管，以備取樣檢測；

6、目標蛋白洗脫

(1) 加入 2~5mLElution Buffer（用戶可根據(jù)需要改變洗脫體積調(diào)整目標蛋白濃度）于離心管中，蓋緊離心管蓋，然后將離心管置于垂直混合儀上，室溫垂直混合洗脫 10min；磁性分離，收集洗脫液到新的離心管中，即為純化的目標蛋白樣品；

(2) 如果需要，可以重復(fù)上述步驟 1 次，收集樣品到新的離心管中，以檢測目標蛋白是否洗脫wan全。

7、磁珠再生和保存

(1) NaOH 再生：洗脫目的蛋白后的磁珠按照以下順序進行洗滌： 5~10mL 純化水洗滌 3 次、5~10 mL 0.5M NaOH 洗滌 3 次、5~10mL 純化水洗滌至中性，最后加入 10mL 保存液，將磁珠放置2~8℃環(huán)境保存。

(2) HABA 再生：用脫硫生wu素洗脫目標蛋白的磁珠還可以用 HABA 緩沖液再生，加入 5~10mL1mMHABA 洗滌磁珠 5 次，接著用 BindingBuffer 洗滌磁珠至磁珠本身顏色，每次洗滌 5 min， 最后加入 10mL 保存液，將磁珠放置 2~8°C 環(huán)境保存。

蛋白純化流程的優(yōu)化

以上操作流程適用于大部分 Strep-TagII 標簽蛋白的純化，根據(jù)目標蛋白與 Strep-Tactin 蛋白純化磁珠的結(jié)合性能不同，用戶可以從以下幾個方面對純化流程進行優(yōu)化，以提高目標蛋白的回收率和純度。

提高目標蛋白回收率的參考方法：

(1) 延長蛋白溶液與磁珠孵育的時間；

(2) 添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標蛋白降解；

(3) 增加磁珠用量；

(4) 延長洗脫目標蛋白的時間或增加洗脫次數(shù)；

提高目標蛋白純度的參考方法：

(1) 在純化過程中添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標蛋白降解；

(2) 延長洗滌的時間，增加洗滌次數(shù)；

注意事項

(1) 首ci使用本產(chǎn)品前，請務(wù)必詳細閱讀本用戶手冊；

(2) 磁珠使用和保存過程中應(yīng)避免冷凍、干燥和高速離心等操作；

(3) 在使用本產(chǎn)品前，請務(wù)必充分振蕩使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài)；

(4) 請選用質(zhì)量好的移液器吸頭和離心管，以免磁珠貼壁或混合過程發(fā)生滲漏引起磁珠的損耗；

(5) 磁珠與溶液混合過程中，如果溶液粘稠無法通過翻轉(zhuǎn)離心管重懸磁珠，可采用移液器反復(fù)吹吸或短時漩渦混合使磁珠充分重懸；

(6) 用戶可根據(jù)實際需要保留經(jīng)磁性分離移去的上清液，進行取樣檢測，以便分析純化過程和優(yōu)化蛋白純化流程；

(7) 本產(chǎn)品可以重復(fù)使用，重復(fù)使用時，建議純化同種蛋白，純化不同種類的蛋白時，建議使用新的磁珠，以防交叉污染；

(8) 本產(chǎn)品需與磁性分離器配套使用；

(9) 本產(chǎn)品僅供研究使用。

Strep-tag II 蛋白純化磁珠-常備現(xiàn)貨 

產(chǎn)品訂購信息：

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